DNA 分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。 DNA 分子在高于等电点的 pH 溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。由于糖 - 磷酸骨架在结构上的重复性质,相同数量的双链 DNA 几乎具有等量的净电荷,因此它们能以同样的速度向正极移动。
制备琼脂糖凝胶pSURE -T Simple 载体连接试剂盒
1 .称 1. 2g 琼脂糖,加 100ml 电泳缓冲液( 1×TAE )加热熔化,取出摇匀,即为 1. 2% 的凝胶。
2. 当胶液冷至 60℃ 时,加 EB10μl ,小心混匀,缓慢倒入制胶模具中,在胶一端插上梳子。
3 .待胶凝固后,拨出梳子,将模具置于电泳槽中,加入 1×TAE ,让液面高于胶面 2 -3mm 。
4 .取 4ul 质粒,加 2ul lodaing buffer , 6ulddH 2 O ,混匀,用加样器吸取样品。加入点样孔中,注意加样器吸头应恰好置于凝胶点样孔中,不可刺穿凝胶,也要防止将样品溢出孔外。
5 .接通电源, 1-5V/cm 电压,开始电泳。pSURE -T Simple 载体连接试剂盒
6 .当溴酚兰染料移动到距离胶前沿 1 -50px 处,停止电泳。
7. 切断电源后,取出凝胶,在紫外灯( 360nm 、 312nm 或 254nm )下或经凝胶成像系统观察或拍照。
碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒 DNA 与线性染色体 DNA 在拓扑学上的差异来分离它们。在 pH 值介于 12. 0-12. 5 这个狭窄的范围内,线性的 DNA 双螺旋结构解开而被变性,尽管在这样的条件下,共价闭环质粒 DNA 的氢键会被断裂,但两条互补链彼此相互盘绕,仍会紧密地结合在一起。当加入 Ph4. 8 的乙酸钾高盐缓冲液恢复 pH 至中性时,共价闭合环状的质粒 DNA 的两条互补链仍保持在一起,因此复性迅速而准确,而线性的染色体 DNA 的两条互补链彼此已完全分开,复性就不会那么迅速而准确,它们缠绕成网状结构,通过离心,染色体 DNA 与不稳定的大分子 RNA 、蛋白质 -SDS 复合物等一起沉淀下来而被除去。
pSURE -T Simple 载体连接试剂盒相关产品系列表:
xy-E12802 大鼠神经营养因子4(NT-4)ELISA试剂盒96t/48t Rat Neurotrophin 4,NT-4 ELISAkit
xy-E12803 大鼠神经营养因子3(NT-3)ELISA试剂盒96t/48t Rat Neurotrophin 3,NT-3 ELISAkit
xy-E12804 大鼠神经生长因子(NGF)ELISA试剂盒96t/48t Rat Nerve growth factor,NGF ELISAkit
xy-E12805 大鼠巨噬细胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)ELISA试剂盒96t/48t Rat macrophage inflammatory protein 3α,MIP-3α
pSURE -T Simple 载体连接试剂盒
ELISAkit
xy-E12806 大鼠层连蛋白/板层素(LN)ELISA试剂盒96t/48t Rat Laminin,LN ELISAkit
xy-E12807 大鼠白介素6(IL-6)ELISA试剂盒96t/48t Rat Interleukin 6,IL-6 ELISAkit
xy-E12808 大鼠白介素4(IL-4)ELISA试剂盒96t/48t Rat Interleukin 4,IL-4 ELISAkit
xy-E12809 大鼠白介素2(IL-2)ELISA试剂盒96t/48t Rat Interleukin 2,IL-2 ELISAkit
xy-E12810 大鼠白介素1α(IL-1α)ELISA试剂盒96t/48t Rat Interleukin 1α ,IL-1α ELISAkit
xy-E12811 大鼠白介素18(IL-18)ELISA试剂盒96t/48t Rat Interleukin 18,IL-18 ELISAkit
xy-E12812 大鼠白介素10(IL-10)ELISA试剂盒96t/48t Rat Interleukin 10,IL-10 ELISAkit
xy-E12813 大鼠胰岛素样生长因子2(IGF-2)ELISA试剂盒96t/48t Rat Insulin-like growth factor 2,IGF-2 ELISAkit
xy-E12814 大鼠胰岛素样生长因子1(IGF-1)ELISA试剂盒96t/48t Rat Insulin-like growth factor 1,IGF-1 ELISAkit
xy-E12815 大鼠γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒96t/48t Rat Interferon γ ,IFN-γ ELISAkit
xy-E12816 大鼠细胞间粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA试剂盒96t/48t Rat intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1 ELISAkit
xy-E12817 大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA试剂盒96t/48t Rat Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating
Factor,GM-CSF ELISAkit
xy-E12818 大鼠胶质细胞系来源的神经营养因子(GDNF)ELISA试剂盒96t/48t Rat glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF