一步法大提质粒DNAout

一步法大提质粒DNAout本实验方法的基本原理是，在高盐状态下，硅胶膜专一性地吸附DNA；而在低盐或水溶液状态下，DNA被洗脱下来。此法简便快捷，可在30分钟内同时提纯二十多个样品。从3～5ml培养过夜的含高拷贝质粒的菌液中可以获得10～20μg高纯度的质粒DNA，用于酶切、转化、DNA自动测序和手工测序等。

一步法大提质粒DNAout是一种使用破壁酶(Lyticase)消化去除酵母细胞壁，然后采用一种新型的酵母质粒纯化柱实现从酵母细胞中进行小量质粒快速抽提的试剂盒。

1无需酚氯仿抽提，无需酒精沉淀，12个样品只需约1-1.5小时即可完成。

2试剂盒提供了破壁酶(Lyticase)，酵母收集后，加入Lyticase消化去除细胞壁，接着采用传3统碱裂法裂解细胞，然后将获得的上清液转移至结合柱结合DNA，经过离心快速洗涤，最后用洗脱液洗脱出酵母质粒DNA。

4由于采用了高浓度的破壁酶，无需再使用玻璃珠，可以避免因为玻璃珠的机械作用带来的酵母基因组DNA污染。

一步法大提质粒DNAout纯化柱可以结合的质粒量的上限约为20微克。质粒DNA的产量依赖于酵母携带质粒的拷贝数，酵母菌株以及生长条件。通常酵母质粒的拷贝数较低，1.5-5ml培养过夜的酵母抽提获得的质粒DNA量约为1-3微克左右。高拷贝酵母质粒抽提时的得率会大大提高。抽提所得质粒的量与酵母培养浓度、质粒拷贝数、酵母品系等因素有关。

使用本试剂盒抽提得到的酵母质粒DNA可用于各种常规分子生物学实验，如转化、PCR、基于PCR的突变、体外转录、酶切、测序、文库筛选等。

一步法大提质粒DNAout相关产品如下：

100944-2 克必隆U6载体 

60803A   可保种型蓝白T载体 

60803B   可保种型蓝白T载体 

60603-1 即用型蓝白T载体 

90601-2 EGFP-N3质粒 

100401-2 EGFP-N1质粒 

80501-2 IRES2-EGFP质粒 

60104-2 pIRESpuro质粒 

60908 常用载体 

90804-5 pBR322质粒 

100402-2 pET28a质粒 

100701-2 pET32a质粒 

91001A-5 pUC18/pUC19质粒 

91001B-5 pUC18/pUC19质粒 

90407-50 λDNA 

100817-200 MDS 42recA菌种 

100818-200 MDS 42recA trfA菌种 

100819-200 MDS 42T7lac菌种 

100857-1 BL21（DE3）菌种 

100858-1 BL21（DE3）pLysS 菌种 

81023-1 DH5α菌种 

100852 HB101菌种 

100853-1 JM109菌种 

100854-1 SURE菌种 

100855 TG1菌种 

100861 TOP10菌种 

100856 XL1-BLUE菌种