人纤维蛋白原本实验方法的基本原理是,在高盐状态下,硅胶膜专一性地吸附DNA;而在低盐或水溶液状态下,DNA被洗脱下来。此法简便快捷,可在30分钟内同时提纯二十多个样品。从3~5ml培养过夜的含高拷贝质粒的菌液中可以获得10~20μg高纯度的质粒DNA,用于酶切、转化、DNA自动测序和手工测序等。
人纤维蛋白原是一种使用破壁酶(Lyticase)消化去除酵母细胞壁,然后采用一种新型的酵母质粒纯化柱实现从酵母细胞中进行小量质粒快速抽提的试剂盒。
1无需酚氯仿抽提,无需酒精沉淀,12个样品只需约1-1.5小时即可完成。
2试剂盒提供了破壁酶(Lyticase),酵母收集后,加入Lyticase消化去除细胞壁,接着采用传3统碱裂法裂解细胞,然后将获得的上清液转移至结合柱结合DNA,经过离心快速洗涤,最后用洗脱液洗脱出酵母质粒DNA。
4由于采用了高浓度的破壁酶,无需再使用玻璃珠,可以避免因为玻璃珠的机械作用带来的酵母基因组DNA污染。
人纤维蛋白原纯化柱可以结合的质粒量的上限约为20微克。质粒DNA的产量依赖于酵母携带质粒的拷贝数,酵母菌株以及生长条件。通常酵母质粒的拷贝数较低,1.5-5ml培养过夜的酵母抽提获得的质粒DNA量约为1-3微克左右。高拷贝酵母质粒抽提时的得率会大大提高。抽提所得质粒的量与酵母培养浓度、质粒拷贝数、酵母品系等因素有关。
使用本试剂盒抽提得到的酵母质粒DNA可用于各种常规分子生物学实验,如转化、PCR、基于PCR的突变、体外转录、酶切、测序、文库筛选等。
人纤维蛋白原相关产品如下:
90903-300 无RNase的DNase
101004A-100 DnaseⅠ(干粉)
101004B-100 DnaseⅠ(干粉含Buffer和贮存液)
90904-50 膜结合DNA清除试剂盒
60204-10 非酶多糖清除剂
81027-50 TRIzol伴侣
71207-5 RNA洗脱液
3660-100 非冻型组织DNA保存液
3660-250 非冻型组织DNA保存液
60910-100 非冻型血液DNA保存液
60910-250 非冻型血液DNA保存液
90315-15 非冻型尿液DNA保存液
90315-100 非冻型尿液DNA保存液
80802A-100 非冻型拭子DNA保存液
80802B-100 非冻型拭子DNA保存液
70603-100 土壤腐殖酸清除剂
70302-100 一步离心式石蜡清除剂
90901-200 菌体内毒素清除剂
90406-100 血液抗凝剂
80603A-50 微型离心管专用研磨杵
80603B-50 微型离心管专用研磨杵
3670-100 动物DNAout
3670-250 动物DNAout
71206-50 柱式动物DNAout
80923-4 大提柱式动物DNAout
3671-50 血液DNAout
3671-150 血液DNAout
60306-50 柱式血液DNAout
80924-4 大提柱式血液DNAout
80920-1 96孔板血液DNAout
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