小鼠抵抗素样蛋白β(RETNLβ)检测试剂盒

温育是小鼠抵抗素样蛋白β(RETNLβ)检测试剂盒测定中影响测定成败最为关键的一个因素。小鼠抵抗素样蛋白β(RETNLβ)检测试剂盒作为一种固相免疫测定，抗原抗体的结合反应在固相上进行，要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合，必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比，即温度越高，则所需时间相对较短。最为常用的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2～8℃。

温育这一步是临床小鼠抵抗素样蛋白β(RETNLβ)检测试剂盒测定中最容易出现问题的步骤。通常目前国内ELISA商品试剂盒的反应温育时间为37℃ 30分钟～1小时，进口ELISA试剂盒则通常为37℃ 1～2小时才能有较完全的结合，低于1小时，可能会影响测定下限。因此，关于温育，在实际测定操作中一定要注意以下几点：

（1）要保证在设定的温度下有足够的反应时间。一般来说，加完样本和/或反应试剂后，将微孔板从室温拿至水浴箱或温箱中时，孔内温度从室温升至37℃，需要一定的时间，尤其是在室温比较低以及非水浴的状态下，这段升温时间可能还比较长，而在临床实验室中，很少有人注意这个问题，通常是将微孔板一放入温箱即开始计时，这样就很容易造成实际测定中温育时间不够，弱阳性样本测不出来的问题。曾有一地处南方的血站同行提出了一个问题，就是在每一年的冬季总有那么一个多月的时间，在做HBsAg测定的室内质控中，测定由卫生部临床检验中心供应的1 ng/ml弱阳性样本时，总是测不出来，不知原因为何？这可能就与南方冬天室内温度较低有关，此时微孔板转入温箱后37℃温育时间不够，以致弱阳性样本测定为阴性。因此，为保证37℃下足够的温育时间，小鼠抵抗素样蛋白β(RETNLβ)检测试剂盒临床实验室可自行确定本实验室不同季节（不同室温下）微孔板从室温拿至温箱后需要多长时间孔内温度才能达到37℃，从而适当延长板条在温箱中的放置时间。具体的做法是，用一小温度计放置板孔反应溶液中测量观察即可。

（2）温育温度的选择。在有的ELISA试剂盒的说明书中，指出温育温度可有两种，例如，一种是37℃下1小时，另一种则为43℃下45分钟。从免疫测定的抗原抗体反应的本质来看，在较低的温度下反应较长的时间最为完全。如2～8℃下反应24小时。较高的反应温度，由于分子运动的加怜惜，反应时间缩短，这一点对分子含量较多的强阳性样本的测定没有问题，但对分子含量少的弱阳性样本则有漏检的可能。因此，我们建议在临床小鼠抵抗素样蛋白β(RETNLβ)检测试剂盒测定中尽量使用较低温育温度较长反应时间的条件。

（3）“边缘效应”的排除。以前在使用96孔板的ELISA测定中，常发现有“边缘效应”，即外周孔显色较中心孔深，产生这种“边缘效应”的原因可能为 96孔板周孔与中心孔表面或热力学特征的不同。但有研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体，在实验室的常规 ELISA测定中，将板从室温（通常在25℃左右）置于37℃温箱，板也升温时，在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。因此使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时，将板和溶液均加热至温育温度（如37℃），就可以很容易地排除“边缘效应”，并且可提高测定的重复性。

总而言之，在临床小鼠抵抗素样蛋白β(RETNLβ)检测试剂盒测定中，要保证好的测定效果，可采用下述简单办法来确保温育条件，即尽量采用水浴，温育中让微孔板浮于水面上，或将浸透水的沙布放入一大饭盒中成一湿盒，放于温箱中，这样就会因为板条孔底部直接与37℃水或湿布的接触，以及水浴箱或湿盒内的高温度，而使反应溶液的温度迅速与温室平衡。

hzL921Hu 人信号素4A(SEMA4A)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Semaphorin 4A (SEMA4A) 

hzM373Hu 人Tolloid样蛋白1(TLL1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Tolloid Like Protein 1 (TLL1) 

hzM893Hu 人含RNA结合冷休克域蛋白E1(CSDE1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Cold Shock Domain Containing Protein E1, RNA Binding (CSDE1) 

hzP710Hu 人C-型凝集素域家族11成员A(CLEC11A)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for C-Type Lectin Domain Family 11, Member A (CLEC11A) 

hzQ421Hu 人丝氨酸蛋白酶23(PRSS23)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Protease, Serine 23 (PRSS23) 

hzF416Hu 人巢蛋白2(NID2)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Nidogen 2 (NID2) 

hzJ932Hu 人FlightlessⅠ同源物(FLIⅠ)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Flightless I Homolog (FLII) 

hzG850Hu 人促泌素(SCGN)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Secretagogin (SCGN) 

hzG474Hu 人多巴脱羧酶(DDC)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Dopa Decarboxylase (DDC) 

hzA175Hu 人干扰素α4(IFNα4)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Interferon Alpha 4 (IFNa4) 

hzD498Hu 人运动神经元生存蛋白2(SMN2)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Survival Of Motor Neuron 2, HZntromeric (SMN2) 

hzE140Hu 人γ-谷氨酰基转氨酶5(γGT5)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Gamma-Glutamyltransferase 5 (gGT5) 

hzG981Hu 人谷氧还蛋白(GLRX)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Glutaredoxin (GLRX) 

hzK240Hu 人解整合素金属蛋白酶19(ADAM19)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for A Disintegrin And Metalloprotease 19 (ADAM19) 

hzB387Hu 人白细胞免疫球蛋白样受体亚家族A成员3(LILRA3)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Leukocyte Immunoglobulin Like ReHZptor Subfamily A, Member 3 (LILRA3) 

hzH089Hu 人联会复合体蛋白3(SYCP3)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Synaptonemal Complex Protein 3 (SYCP3) 

hzM667Hu 人结肠癌转移关联基因1(MACC1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Metastasis Associated In Colon CanHZr 1 (MACC1) 

hzF219Hu 人外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶1(ENPP1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Ectonucleotide Pyrophosphatase/Phosphodiesterase 1 (ENPP1) 

hzF332Hu 人复合素2(CPLX2)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Complexin 2 (CPLX2) 

hzN942Hu 人自噬相关16样蛋白1(ATG16L1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Autophagy Related Protein 16 Like Protein 1 (ATG16L1) 

hzC830Hu 人腺苷酸环化酶关联蛋白2(CAP2)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Adenylyl Cyclase Associated Protein 2 (CAP2) 

hzE293Hu 人Rac-GTP酶激活蛋白1(RACGAP1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Rac-GTPase Activating Protein 1 (RACGAP1) 

hzJ564Hu 人BTG3关联核蛋白(BANP)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for BTG3 Associated Nuclear Protein (BANP) 

hzC501Hu 人乙二醛酶Ⅰ(GLO1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Glyoxalase I (GLO1)