温育是小鼠成纤维细胞生长因子19(FGF19)检测试剂盒测定中影响测定成败最为关键的一个因素。小鼠成纤维细胞生长因子19(FGF19)检测试剂盒作为一种固相免疫测定,抗原抗体的结合反应在固相上进行,要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合,必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比,即温度越高,则所需时间相对较短。最为常用的温育温度有37℃和室温,其次是43℃和2~8℃。
温育这一步是临床小鼠成纤维细胞生长因子19(FGF19)检测试剂盒测定中最容易出现问题的步骤。通常目前国内ELISA商品试剂盒的反应温育时间为37℃ 30分钟~1小时,进口ELISA试剂盒则通常为37℃ 1~2小时才能有较完全的结合,低于1小时,可能会影响测定下限。因此,关于温育,在实际测定操作中一定要注意以下几点:
(1)要保证在设定的温度下有足够的反应时间。一般来说,加完样本和/或反应试剂后,将微孔板从室温拿至水浴箱或温箱中时,孔内温度从室温升至37℃,需要一定的时间,尤其是在室温比较低以及非水浴的状态下,这段升温时间可能还比较长,而在临床实验室中,很少有人注意这个问题,通常是将微孔板一放入温箱即开始计时,这样就很容易造成实际测定中温育时间不够,弱阳性样本测不出来的问题。曾有一地处南方的血站同行提出了一个问题,就是在每一年的冬季总有那么一个多月的时间,在做HBsAg测定的室内质控中,测定由卫生部临床检验中心供应的1 ng/ml弱阳性样本时,总是测不出来,不知原因为何?这可能就与南方冬天室内温度较低有关,此时微孔板转入温箱后37℃温育时间不够,以致弱阳性样本测定为阴性。因此,为保证37℃下足够的温育时间,小鼠成纤维细胞生长因子19(FGF19)检测试剂盒临床实验室可自行确定本实验室不同季节(不同室温下)微孔板从室温拿至温箱后需要多长时间孔内温度才能达到37℃,从而适当延长板条在温箱中的放置时间。具体的做法是,用一小温度计放置板孔反应溶液中测量观察即可。
(2)温育温度的选择。在有的ELISA试剂盒的说明书中,指出温育温度可有两种,例如,一种是37℃下1小时,另一种则为43℃下45分钟。从免疫测定的抗原抗体反应的本质来看,在较低的温度下反应较长的时间最为完全。如2~8℃下反应24小时。较高的反应温度,由于分子运动的加怜惜,反应时间缩短,这一点对分子含量较多的强阳性样本的测定没有问题,但对分子含量少的弱阳性样本则有漏检的可能。因此,我们建议在临床小鼠成纤维细胞生长因子19(FGF19)检测试剂盒测定中尽量使用较低温育温度较长反应时间的条件。
(3)“边缘效应”的排除。以前在使用96孔板的ELISA测定中,常发现有“边缘效应”,即外周孔显色较中心孔深,产生这种“边缘效应”的原因可能为 96孔板周孔与中心孔表面或热力学特征的不同。但有研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体,在实验室的常规 ELISA测定中,将板从室温(通常在25℃左右)置于37℃温箱,板也升温时,在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。因此使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时,将板和溶液均加热至温育温度(如37℃),就可以很容易地排除“边缘效应”,并且可提高测定的重复性。
总而言之,在临床小鼠成纤维细胞生长因子19(FGF19)检测试剂盒测定中,要保证好的测定效果,可采用下述简单办法来确保温育条件,即尽量采用水浴,温育中让微孔板浮于水面上,或将浸透水的沙布放入一大饭盒中成一湿盒,放于温箱中,这样就会因为板条孔底部直接与37℃水或湿布的接触,以及水浴箱或湿盒内的高温度,而使反应溶液的温度迅速与温室平衡。
hzC061Hu 人血小板衍生生长因子受体β(PDGFRβ)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Platelet Derived Growth Factor ReHZptor Beta (PDGFRb)
hzB924Hu 人尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate Oxidase 4 (NOX4)
hzB982Hu 人内皮素受体B(ETRB)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Endothelin ReHZptor B (ETRB)
hzB416Hu 人葡萄糖苷酸酶β(GUSβ)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Glucuronidase Beta (GUSb)
hzB650Hu 人主要碱性蛋白(MBP)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Major Basic Protein (MBP)
hzA662Hu 人白介素7(IL7)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Interleukin 7 (IL7)
hzB886Hu 人血管紧张素转化酶2(AHZ2)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Angiotensin I Converting Enzyme 2 (AHZ2)
hzC036Hu 人转铁蛋白(TRF)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Transferrin (TRF)
hzA303Hu 人半乳糖凝集素3(GAL3)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Galectin 3 (GAL3)
hzA131Hu 人转化生长因子β诱导蛋白(TGFβI)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Transforming Growth Factor Beta InduHZd Protein (TGFbI)
hzC047Hu 人Ki-67蛋白(Ki67P)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Ki-67 Protein (Ki67P)
hzC130Hu 人头蛋白(NOG)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Noggin (NOG)
hzA162Hu 人嗅素4(OLFM4)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Olfactomedin 4 (OLFM4)
hzB271Hu 人IgG-Fc片段低亲和力受体Ⅲb(FcγR3B)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Fc Fragment Of IgG Low Affinity IIIb ReHZptor (FcgR3B)
hzC864Hu 人硬骨素(SOST)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Sclerostin (SOST)
hzB978Hu 人补体因子I(CFI)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Complement Factor I (CFI)
hzD024Hu 人心肌型兰尼定受体2(RYR2)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Ryanodine ReHZptor 2, Cardiac (RYR2)
hzA203Hu 人前动力蛋白受体1(PKR1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Prokineticin ReHZptor 1 (PKR1)
hzA307Hu 人半乳糖凝集素7(GAL7)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Galectin 7 (GAL7)
hzA309Hu 人半乳糖凝集素9(GAL9)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Galectin 9 (GAL9)
hzA115Hu 人前动力蛋白2(PK2)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Prokineticin 2 (PK2)
hzA117Hu 人胞外超氧化物歧化酶(SOD3)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Superoxide Dismutase 3, ExtraHZllular (SOD3)
hzA153Hu 人甲胎蛋白(αFP)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Alpha-Fetoprotein (aFP)
hzC045Hu 人抗存活素抗体(Anti-Surv)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Anti-Survivin Antibody (Anti-Surv)
hzA242Hu 人摄食抑制因子1(NES1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Nesfatin 1 (NES1)
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