温育是小鼠激肽释放酶6(KLK6)检测试剂盒测定中影响测定成败最为关键的一个因素。小鼠激肽释放酶6(KLK6)检测试剂盒作为一种固相免疫测定,抗原抗体的结合反应在固相上进行,要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合,必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比,即温度越高,则所需时间相对较短。最为常用的温育温度有37℃和室温,其次是43℃和2~8℃。
温育这一步是临床小鼠激肽释放酶6(KLK6)检测试剂盒测定中最容易出现问题的步骤。通常目前国内ELISA商品试剂盒的反应温育时间为37℃ 30分钟~1小时,进口ELISA试剂盒则通常为37℃ 1~2小时才能有较完全的结合,低于1小时,可能会影响测定下限。因此,关于温育,在实际测定操作中一定要注意以下几点:
(1)要保证在设定的温度下有足够的反应时间。一般来说,加完样本和/或反应试剂后,将微孔板从室温拿至水浴箱或温箱中时,孔内温度从室温升至37℃,需要一定的时间,尤其是在室温比较低以及非水浴的状态下,这段升温时间可能还比较长,而在临床实验室中,很少有人注意这个问题,通常是将微孔板一放入温箱即开始计时,这样就很容易造成实际测定中温育时间不够,弱阳性样本测不出来的问题。曾有一地处南方的血站同行提出了一个问题,就是在每一年的冬季总有那么一个多月的时间,在做HBsAg测定的室内质控中,测定由卫生部临床检验中心供应的1 ng/ml弱阳性样本时,总是测不出来,不知原因为何?这可能就与南方冬天室内温度较低有关,此时微孔板转入温箱后37℃温育时间不够,以致弱阳性样本测定为阴性。因此,为保证37℃下足够的温育时间,小鼠激肽释放酶6(KLK6)检测试剂盒临床实验室可自行确定本实验室不同季节(不同室温下)微孔板从室温拿至温箱后需要多长时间孔内温度才能达到37℃,从而适当延长板条在温箱中的放置时间。具体的做法是,用一小温度计放置板孔反应溶液中测量观察即可。
(2)温育温度的选择。在有的ELISA试剂盒的说明书中,指出温育温度可有两种,例如,一种是37℃下1小时,另一种则为43℃下45分钟。从免疫测定的抗原抗体反应的本质来看,在较低的温度下反应较长的时间最为完全。如2~8℃下反应24小时。较高的反应温度,由于分子运动的加怜惜,反应时间缩短,这一点对分子含量较多的强阳性样本的测定没有问题,但对分子含量少的弱阳性样本则有漏检的可能。因此,我们建议在临床小鼠激肽释放酶6(KLK6)检测试剂盒测定中尽量使用较低温育温度较长反应时间的条件。
(3)“边缘效应”的排除。以前在使用96孔板的ELISA测定中,常发现有“边缘效应”,即外周孔显色较中心孔深,产生这种“边缘效应”的原因可能为 96孔板周孔与中心孔表面或热力学特征的不同。但有研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体,在实验室的常规 ELISA测定中,将板从室温(通常在25℃左右)置于37℃温箱,板也升温时,在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。因此使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时,将板和溶液均加热至温育温度(如37℃),就可以很容易地排除“边缘效应”,并且可提高测定的重复性。
总而言之,在临床小鼠激肽释放酶6(KLK6)检测试剂盒测定中,要保证好的测定效果,可采用下述简单办法来确保温育条件,即尽量采用水浴,温育中让微孔板浮于水面上,或将浸透水的沙布放入一大饭盒中成一湿盒,放于温箱中,这样就会因为板条孔底部直接与37℃水或湿布的接触,以及水浴箱或湿盒内的高温度,而使反应溶液的温度迅速与温室平衡。
hzA519Hu 人载脂蛋白A1(APOA1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Apolipoprotein A1 (APOA1)
hzA520Hu 人蛋白激酶R(PKR)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Protein Kinase R (PKR)
hzA536Hu 人亮氨酰氨基肽酶(LAP)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Leucine Aminopeptidase (LAP)
hzA565Hu 人硫酸肝素蛋白聚糖(HSPG)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Heparan Sulfate Proteoglycan (HSPG)
hzA649Hu 人硫酸皮肤素(DS)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Dermatan Sulfate (DS)
hzA723Hu 人硫酸软骨素(CS)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Chondroitin Sulfate (CS)
hzA724Hu 人前列腺素D2合成酶(PGD2S)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Prostaglandin D2 Synthase, Brain (PGD2S)
hzA725Hu 人葡萄糖6磷酸异构酶(GPI)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Glucose 6 Phosphate Isomerase (GPI)
hzA726Hu 人转甲状腺素蛋白(TTR)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Transthyretin (TTR)
hzA727Ge 人前列环素(PGI2)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Prostacyclin (PGI2)
hzA729Hu 人桥粒芯糖蛋白1(DSG1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Desmoglein 1 (DSG1)
hzA805Hu 人鞘磷脂(SPH)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Sphingomyelin (SPH)
hzA996Hu 人胎儿血红蛋白(HBF)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Fetal Hemoglobin (HBF)
hzA998Hu 人磷脂酰肌醇蛋白聚糖4(GPC4)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Glypican 4 (GPC4)
hzB214Hu 人天冬氨酸转氨酶(AST)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Aspartate Aminotransferase (AST)
hzC536Hu 人通用转录因子ⅡA肽1(GTF2A1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for General Transcription Factor IIA, Polypeptide 1 (GTF2A1)
hzB246Hu 人细胞角蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Cytokeratin Fragment Antigen 21-1 (CYFRA21-1)
hzB283Hu 人上皮细胞粘附分子(EPCAM)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Epithelial HZll Adhesion Molecule (EPCAM)
hzB307Hu 人纤维蛋白肽B(FPB)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Fibrinopeptide B (FPB)
hzB389Hu 人含血管性血友病因子A域蛋白2(vWA2)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Von Willebrand Factor A Domain Containing Protein 2 (vWA2)
hzB390Hu 人腺苷脱氨酶(ADA)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Adenosine Deaminase (ADA)
hzB403Hu 人腺苷酸环化酶2(ADCY2)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Adenylate Cyclase 2, Brain (ADCY2)
hzB406Hu 人脂多糖结合蛋白(LBP)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Lipopolysaccharide Binding Protein (LBP)
hzB408Hu 人原卟啉(EPP)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Erythrocyte Protoporphyrin (EPP)
hzB409Hu 人血红蛋白(HB)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Hemoglobin (HB)
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hzB524Hu 人神经元凋亡抑制蛋白(NAIP)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Neuronal Apoptosis Inhibitory Protein (NAIP)
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