温育是小鼠淀粉样前体蛋白(APP)检测试剂盒测定中影响测定成败最为关键的一个因素。小鼠淀粉样前体蛋白(APP)检测试剂盒作为一种固相免疫测定,抗原抗体的结合反应在固相上进行,要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合,必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比,即温度越高,则所需时间相对较短。最为常用的温育温度有37℃和室温,其次是43℃和2~8℃。
温育这一步是临床小鼠淀粉样前体蛋白(APP)检测试剂盒测定中最容易出现问题的步骤。通常目前国内ELISA商品试剂盒的反应温育时间为37℃ 30分钟~1小时,进口ELISA试剂盒则通常为37℃ 1~2小时才能有较完全的结合,低于1小时,可能会影响测定下限。因此,关于温育,在实际测定操作中一定要注意以下几点:
(1)要保证在设定的温度下有足够的反应时间。一般来说,加完样本和/或反应试剂后,将微孔板从室温拿至水浴箱或温箱中时,孔内温度从室温升至37℃,需要一定的时间,尤其是在室温比较低以及非水浴的状态下,这段升温时间可能还比较长,而在临床实验室中,很少有人注意这个问题,通常是将微孔板一放入温箱即开始计时,这样就很容易造成实际测定中温育时间不够,弱阳性样本测不出来的问题。曾有一地处南方的血站同行提出了一个问题,就是在每一年的冬季总有那么一个多月的时间,在做HBsAg测定的室内质控中,测定由卫生部临床检验中心供应的1 ng/ml弱阳性样本时,总是测不出来,不知原因为何?这可能就与南方冬天室内温度较低有关,此时微孔板转入温箱后37℃温育时间不够,以致弱阳性样本测定为阴性。因此,为保证37℃下足够的温育时间,小鼠淀粉样前体蛋白(APP)检测试剂盒临床实验室可自行确定本实验室不同季节(不同室温下)微孔板从室温拿至温箱后需要多长时间孔内温度才能达到37℃,从而适当延长板条在温箱中的放置时间。具体的做法是,用一小温度计放置板孔反应溶液中测量观察即可。
(2)温育温度的选择。在有的ELISA试剂盒的说明书中,指出温育温度可有两种,例如,一种是37℃下1小时,另一种则为43℃下45分钟。从免疫测定的抗原抗体反应的本质来看,在较低的温度下反应较长的时间最为完全。如2~8℃下反应24小时。较高的反应温度,由于分子运动的加怜惜,反应时间缩短,这一点对分子含量较多的强阳性样本的测定没有问题,但对分子含量少的弱阳性样本则有漏检的可能。因此,我们建议在临床小鼠淀粉样前体蛋白(APP)检测试剂盒测定中尽量使用较低温育温度较长反应时间的条件。
(3)“边缘效应”的排除。以前在使用96孔板的ELISA测定中,常发现有“边缘效应”,即外周孔显色较中心孔深,产生这种“边缘效应”的原因可能为 96孔板周孔与中心孔表面或热力学特征的不同。但有研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体,在实验室的常规 ELISA测定中,将板从室温(通常在25℃左右)置于37℃温箱,板也升温时,在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。因此使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时,将板和溶液均加热至温育温度(如37℃),就可以很容易地排除“边缘效应”,并且可提高测定的重复性。
总而言之,在临床小鼠淀粉样前体蛋白(APP)检测试剂盒测定中,要保证好的测定效果,可采用下述简单办法来确保温育条件,即尽量采用水浴,温育中让微孔板浮于水面上,或将浸透水的沙布放入一大饭盒中成一湿盒,放于温箱中,这样就会因为板条孔底部直接与37℃水或湿布的接触,以及水浴箱或湿盒内的高温度,而使反应溶液的温度迅速与温室平衡。
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hzB859Ra 大鼠凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Lectin Like Oxidized Low Density Lipoprotein ReHZptor 1 (LOX1)
hzA620Ra 大鼠解整合素金属蛋白酶8(ADAM8)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for A Disintegrin And MetalloproteaHZ 8 (ADAM8)
hzA780Ra 大鼠乳铁传递蛋白(LTF)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Lactoferrin (LTF)
hzA624Ra 大鼠肝癌源性生长因子(HDGF)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Hepatoma Derived Growth Factor (HDGF)
hzA629Ra 大鼠BH3相互作用域死亡激动剂(Bid)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for BH3 Interacting Domain Death Agonist (Bid)
hzA771Ra 大鼠趋化因子C-X-C-基元配体16(CXCL16)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Chemokine C-X-C-Motif Ligand 16 (CXCL16)
hzA630Ra 大鼠糖原合酶激酶3α(GSK3α)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Glycogen SynthaHZ KinaHZ 3 Alpha (GSK3a)
hzA180Ra 大鼠Ⅳ型胶原(COL4)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Collagen Type IV (COL4)
hzA609Ra 大鼠谷胱甘肽S转移酶α1(GSTα1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Glutathione S TransferaHZ Alpha 1 (GSTa1)
hzA637Ra 大鼠氨基己糖苷酶Bβ(HEXβ)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for HexosaminidaHZ B Beta (HEXb)
hzA635Ra 大鼠补体因子H(CFH)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Complement Factor H (CFH)
hzA634Ra 大鼠胰蛋白酶原激活肽(TAP)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Trypsinogen Activation Peptide (TAP)
hzA638Ra 大鼠内脂素(VF)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Visfatin (VF)
hzA675Ra 大鼠凝血因子Ⅴ(F5)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Coagulation Factor V (F5)
hzA676Ra 大鼠凝血因子ⅩⅢ(F13)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Coagulation Factor XIII (F13)
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hzB176Ra 大鼠脑啡肽(ENK)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Enkephalin (ENK)
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hzA647Ra 大鼠Smad同源物1(Smad1)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Mothers Against Decapentaplegic Homolog 1 (Smad1)
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hzA639Ra 大鼠Ⅰ型胶原交联氨基端肽(NTXⅠ)ELISA试剂盒说明书 ELISA Kit for Cross Linked N-Telopeptide Of Type I Collagen (NTXI)
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