人8-异构前列腺素(8-isoprostane)ELISA试剂盒中加样须注意如下问题:
1. 吸取样品时,加样枪吸头不应黏附多余的液体;加样时不可90度向孔中滴加液体,这样会导致液体残留在吸头上,加样不准确!
2. 不要将吸头伸入孔中,一方面若接触孔底可能压弯吸头,另一方面可能会将孔中的液体吹起来,加样不准确!
正确的加样方法应为45度,吸头贴着孔壁加入,应注意:
1. 角度太小,会使液体残留在孔壁上,导致加样不准确!
2. 吸头应当贴着管壁和液面的交界处!
在目前的以HRP作为标记酶的商品ELISA试剂盒中,如以TMB为底物,则提供的底物为A和B两瓶应用液;如以OPD为底物,则试剂盒提供OPD片剂或粉剂,临用前配制。一般商品试剂盒显色反应条件为37℃或室温反应15~30分钟。从理论上说,37℃30分钟才可以使HRP的底物催化反应完全,尽管在最初的10分钟内,绝大部份催化反应即可完成。因此,为使弱阳性样本孔能有充分的显色,建议在37℃下反应25~30分钟后,终止反应比色测定。
此外,人8-异构前列腺素(8-isoprostane)ELISA试剂盒在加入底物开始显色反应前,最好是先检查一下底物溶液的有效性,即可将A和B两种液各加一滴于清洁的空板孔或eppendorf管中,观察是否有显色出现,如有,则说明底物已变质。以OPD为底物,配好后应为无色,否则就不能使用。以TMB为底物,整个显色反应过程无需避光,而以OPD为底物,则需避光进行。关于TMB和OPD的显色反应特点及注意点可参考前面有关章节内容。显色反应完成后,加入酸终止反应,振荡混匀后即可进行下面的比色测定或肉眼判断结果。
1.3 正态分布及标准差 ELISA试验中,检验同一样本达20次以上时,就会发现这组数据(指测定结果的吸光值)分布在均值两侧,大部分集中在均值附近。如果以测定值为横坐标,以出现的频率为纵坐标作图,就可绘出一个呈钟形的曲线图。如图5-1,钟顶处为均值,其他值以均值为中心对称分布,这就是正态分布。 正态曲线以下的面积称概率,常用样本的均数(X)和标准差(SD)来表示,其计算方法如下: 均值、标准差和概率的关系如下: X±1SD,概率0.68 X±2SD,概率0.95 X±3SD,概率0.99 换言之,当ELSIA检测同一样本达一定次数后所得的一组数据,其中靠近均值(X)的±1SD范围内的数据,占该组数据的68%,在X±2SD范围内分布的数据占总体的95%,人8-异构前列腺素(8-isoprostane)ELISA试剂盒在X±3SD范围内分布的数据占总体的99%。当我们要求检验结果在X±2SD范围内为合格时,将有95%的数据可能合格。
优质的试剂,良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条
件。ELISA的操作因固相载体的形成不同而有所差异,国内医学检验一般均用板式点。
本文将叙述板式ELISA各个操作步骤的注意要点,珠式、管式及磁性球ELSIA,国外试
剂均与特殊仪器配合应用,两者均有详细的使用说明,严格遵照规定操作,必能得出
准确的结果。
人8-异构前列腺素(8-isoprostane)ELISA试剂盒相关产品系列表:
hz-E11390 人优球蛋白(EL)ELISA试剂盒 Human EuglobulinLysis,EL ELISAkit
hz-E11391 人游离血红蛋白(f-Hb)ELISA试剂盒 Human free haemoglobin,f-Hb ELISAkit
hz-E11392 人鱼精蛋白1(PRM1)ELISA试剂盒 Human Protamine 1,PRM1 ELISAkit
hz-E11393 人一氧化碳血红蛋白(HbCO)ELISA试剂盒 Human carboxyhemoglobin,HbCO ELISAkit
hz-E11394 人血小板相关免疫球蛋白(PAIg)ELISA试剂盒 Human platelet-associated immunoglobulins,PAIg ELISAkit
hz-E11395 人血小板相关补体3(PAC3)ELISA试剂盒 Human platelet-associated Complement 3,PAC3 ELISAkit
hz-E11396 人血栓素A2(TX-A2)ELISA试剂盒 Human Thromboxane A2,TX-A2 ELISAkit
hz-E11397 人血红蛋白H(HbH)ELISA试剂盒 Human Hemoglobin H,HbH ELISAkit
hz-E11398 人血红蛋白C(HbC)ELISA试剂盒 Human Hemoglobin C,HbC ELISAkit
hz-E11399 人纤维蛋白(Fibrin)ELISA试剂盒 Human Fibrin ELISAkit
hz-E11400 人血纤肽/纤维蛋白肽B(FPB)ELISA试剂盒 Human fibrinopeptide B,FPB ELISAkit
hz-E11401 人纤溶酶原激活剂(PLGA)ELISA试剂盒 Human plasminogen activator,PLGA ELISAkit
hz-E11402 人细胞膜表面免疫球蛋白(SmIg)ELISA试剂盒 Human Surface Membrane Immunoglobulin,SmIg ELISAkit
hz-E11403 人前白蛋白(PA)ELISA试剂盒 Human prealbumin,PA ELISAkit
hz-E11404 人硫酸肝素糖蛋白(HSPG)ELISA试剂盒 Human heparin sulphate protoglycans,HSPG ELISAkit
hz-E11405 人冷球蛋白(CG)ELISA试剂盒 Human Cryoglobulin,CG ELISAkit
hz-E11406 人红细胞膜蛋白(EMP)ELISA试剂盒 Human erythrocyte membrane protein,EMP ELISAkit
hz-E11407 人高铁血红蛋白(MHB)ELISA试剂盒 Human Methemoglobin,MHB ELISAkit
hz-E11408 人低分子肝素(LMWH)ELISA试剂盒 Human low molecular weight heparin,LMWH ELISAkit
hz-E11409 人补体3裂解产物(C3SP)ELISA试剂盒 Human Complement 3 split product,C3SP ELISAkit
hz-E11410 人补体片段3b受体(C3bR)ELISA试剂盒 Human Complement fragment 3b rccptor,C3bR ELISAkit
hz-E11411 人补体1抑制物抗体(C1INH)ELISA试剂盒 Human Complement 1 inhibitor autoantibody,C1INH ELISAkit
hz-E11412 人B因子(BF)ELISA试剂盒 Human factor B,BF ELISAkit
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