细胞支原体污染一般情况及预防措施

2014-09-23 13:32

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资料摘要：

细胞株若受到细菌、真菌、支原体、或是特定病毒等之污染时，会严重的影响实验的结果。而细菌、真菌等之微生物污染时，较易自培养基等的外观变化察觉。但是若受到支原体之污染时，细胞之外观较无明显变化，但是其污染会造成细胞之生长速率缓慢、细胞产生病变之型态改变等等变化。各国细胞库支原体污染的统计表，如下：国家　受支原体污染(%) 报告年度 USA－FDA 15 1993(past 30 years) USA－ATCC 15-20 1992 Japan－(IFO，RIKEN，JCR 80~30~22 1981 1987-19931998 Germany－DSM 36 1990-1994 Argentina 65 1987 Israel 32 1986-1993 China 95 1990 造成支原体高污染率的原因为： 1.支原体size 0.1~0.8 um，无细胞壁，可透过一般过滤膜（0.22-0.45 um） 2.支原体污染时，没有明显的肉眼或一般光学显微镜可观察到的特征变化 3.过去缺乏简单、快速且可靠的检测方式 4.细胞流通间缺乏品管，造成实验室间的相互污染 5.研究或操作人员忽略污染问题而支原体污染来源： 1.已受污染的细胞 2.操作人员的疏失 3.已受污染的培养基、血清 4.操作环境不良、实验器具不洁等由于支原体为人体口腔中之正常菌丛，实验室之操作人员的污染亦可能为污染源，须十分注意。而万一细胞已受支原体污染时，最佳的处理原则为将细胞高压灭菌后丢弃，以免污染其它洁净的细胞株。但是若是坚持要作去除支原体污染，有以下几种方法，只不过结果会与原始的细胞特性有差异。去除支原体污染： 1. 抗生素处理：BM-cyclin（Roche），MRA（mycoplasma removal agent，ICN），Ciprofloxcin（Bayer），Enrofloxacin（Bayer） 2. Nucleic acid metabolites：5-bromouracil，Hoechst 33258，bromodeoxyuridine 3. Anti-sera 预防与控制方面可从以下各点加强注意：设备方面： 1.使用已作支原体测试ok之细胞株 2.于另一隔离之区域操作未知是否有支原体污染之细胞 3.使用不添加抗生素的培养基培养细胞检测方面：定期以标准的支原体检测方法检测细胞、培养基、血清、ddH2O有否被支原体污染。实验操作人员之无菌观念与无菌操作技术之要求。有关支原体污染之问题与回答： Q:应如何避免细胞污染？ A:细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和支原体。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之最好方法。 Q:如果细胞发生微生物污染时，应如何处理？ A:直接灭菌后丢弃之。

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