【试剂盒名称】:人基质金属蛋白酶9/明胶酶B(MMP-9/Gelatinase B)ELISA试剂盒
【货号/编号】:BW00149B
【英文名】:Human matrix metalloproteinase 9/Gelatinase B,MMP-9 ELISA Kit
【规格】:96T/48T
【保存条件】:2-8℃
【保质期】:6个月,所有试剂盒均提供最新批次。
Elisa试剂盒实验规则:
1、将液体加到酶标孔中时,避免枪头和孔内液体接触,可使枪头上的液滴和孔壁接触,液滴会自然流下去。
2、液体全部加完后,可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒,混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。
3、温浴时,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,防止水分的蒸发。
4、洗板时,每次洗液加入后,应静置1分钟,使清洗更加彻底。没有洗板机时,倒去液体后,要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。
5、洗液不够时,可用蒸馏水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸缓冲液,加入0.1%的吐温6作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。
Elisa试剂盒标本要求:
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
试剂盒操作步骤:
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。12μg/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液,6μg/L 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液,3μg/L 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液,1.5μg/L 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液,0.75μg/L 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同),标准孔,待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液:将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此重复5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10 分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。
ELISA试剂盒自备物品:
1 、 37 ℃ 恒温箱
2 、 标准规格酶标仪
3 、 精密移液器及一次性吸头
4 、 蒸馏水
5 、 一次性试管
6 、 吸水纸
ELISA试剂盒安全性:
1. 避免直接接触终止液和底物。如不小心接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
2. 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3. 不要用嘴接触试剂盒里的任何成份。
4 Elisa试剂盒请远离儿童
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