人肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒

【试剂盒名称】:人肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒 

【货号/编号】：BW00122B

【英文名】：Human Tumor necrosis factor α,TNF-α ELISA KIT 

【规格】：96T/48T

【保存条件】：2-8℃

【保质期】：6个月，所有试剂盒均提供最新批次。

Elisa试剂盒实验规则：

1、将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。        

2、液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。

3、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。

4、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加彻底。没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。

5、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温6作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。

Elisa试剂盒标本要求：

1．标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

试剂盒操作步骤：

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。12μg/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液,6μg/L 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液,3μg/L 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液,1.5μg/L 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液,0.75μg/L 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同）,标准孔,待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此重复5 次,拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10 分钟.

10. 终止：每孔加终止液50μl,终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。

ELISA试剂盒自备物品：

1 、 37 ℃ 恒温箱

2 、 标准规格酶标仪

3 、 精密移液器及一次性吸头

4 、 蒸馏水

5 、 一次性试管

6 、 吸水纸

ELISA试剂盒安全性：

1． 避免直接接触终止液和底物。如不小心接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

2． 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

3． 不要用嘴接触试剂盒里的任何成份。

4   Elisa试剂盒请远离儿童

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