2023/09/06 10:37
阅读:71
分享:方案摘要:
产品配置单:
HCC827人非小细胞肺癌细胞
型号: 瓶
产地:
品牌: 远慕
¥1
参考报价
小鼠胰岛细胞抗体(ICA)ELISA试剂盒实验准备
型号: 48t/96t
产地:
品牌: 远慕
面议
参考报价
sciencell 1001 内皮细胞培养基ECM
型号: 500ml
产地:
品牌: 远慕
面议
参考报价
小鼠细胞膜表面免疫球蛋白(SmIg)ELISA试剂盒特点
型号: 48t/96t
产地:
品牌: 远慕
面议
参考报价
方案详情:
咱就是说细胞想要长期保存,那肯定是需要冻存起来放液氮保存。那怎样冻存细胞才能保证细胞能正常复苏,不至于冻存死亡呢?下面远慕就来讲讲细胞冻存应该注意的一些地方。
1. 保持冻存前细胞状态良好
冻存前一定要保证细胞状态良好,细胞处于对数生长期,否则不管后面怎么处理,冻存后的细胞状态必然有影响。若细胞密度偏高,培养基已经略微变黄,细胞状态正常,需要换液培养2h以上再冻存细胞;若已完全变黄,细胞死亡超过20%,需要传代后再重新培养至状态正常后再冻存细胞。
2. 消化、吹打细胞按尽量轻柔
如何正确消化、吹打细胞在前面已经讲过了,有兴趣的话可以到以往文章里看看,这里就不再赘述了。冻存后细胞培养瓶和培养皿肯定还是会残留一点细胞,这些残留的细胞加新的培养基继续培养,如果培养正常就可以看出冻存时消化、吹打操作是没有问题的,如果直接死了或者状态不好,那冻存的细胞自然也好不到哪里去,问题出在哪就很明显了。
3. 冻存液配方要给合适的
冻存液配方这个其实不同实验室都有自己的习惯,有FBS+10%DMSO的,也有完全培养基+10%DMSO的,还有基础培养基+血清+DMSO=7:2:1 6:3:1 5:4:1,可以说是五花八门,但总体来说,DMSO一般是不超过12%的,血清浓度越高冻存效果也越好,因此需要多冻几次对比合适的配方。
4. 冻存液要提前配置
冻存液使用时要提前配好,不能直接在细胞悬液中加DMSO冻存细胞,否则DMSO溶解时浓度不均加上溶解放热会损伤细胞活性。可以现配先用,也可以多配一点,4度最多可以保存3个月,-20度可以保存一年。细胞用冻存液重悬后应尽快放到4度或者程序性冻存盒开始冻存,避免长时间室温状态,因为室温条件下DMSO对细胞是有害的。
5. 冻存细胞数量选择
通常来说,冻存细胞都会有一部分细胞死亡,所以冻存剩下的活细胞数量才是决定细胞复苏后能否正常养起来的关键。一般冻存不容易死的细胞数量每管在100-200万就够了,一些冻存很容易死的细胞,比如NK92、THP-1、SF9等细胞数量要稍微高点,300-400万左右为宜。冻存液一般1ml左右每管,这个基本每个实验室都差不多。
6. 冻存程序选择
冻存的时候可以选择用程序性冻存盒直接放到-80度冻存细胞,但要记得异丙醇要及时更换,一般用4-5次异丙醇含水量就超标了,不再适合冻存细胞使用。也可以将冻存管依次在4度10min,-20度2h,-80过夜后液氮保存。-80度不适合细胞长期保存,只能短期保存,最好不要超过一周,否则有部分细胞系活性可能会下降很厉害,长期保存的细胞最好放液氮罐保存。
7. 注意冻存检查
冻存细胞后应在同一批次内随机选一只细胞复苏检测冻存效果, 如果复苏效果不佳的话需要找到问题所在摸索合适条件重新冻存细胞,如果复苏良好的就可以放到液氮里长期保存了。这个也是前面推荐将冻存剩下的细胞继续培养的原因,可以有效避免细胞冻存失败导致绝种。
下载本篇解决方案:
细胞不贴壁原因+促进细胞贴壁的方法
消化不够细胞本身就是成团的;若胰酶处理太久,容易造成细胞膜蛋白损伤,使细胞贴壁不紧,显微镜下观察立体感不强,严重的时候甚至会造成细胞死亡。
生物产业
2024/08/21
抗体亲和力从高变低的原因+提高方法
很多亲和力检测技术都需要提前对作用的分子进行标记处理,但标记处理常常会导致分子不是处于真正的原位环境,且可能带来其他无法预测的额外因素,为分子间相互作用的研究增加了难度。因此,无须标记、实时表征结合过程亲和力的测定方法为分子间相互作用研究提供了便捷。
生物产业
2024/08/19
质粒DNA提取时质粒丢失原因+解决方法
质粒提取失败可能由多种因素引起,这些因素可以大致分为三个类别:细菌培养条件、提取操作步骤以及使用的试剂和工具。识别并解决这些问题,有助于优化实验流程,确保质粒DNA提取的成功。
生物产业
2024/08/16
培养基迅速变黄原因+解决方法
培养基的颜色主要来自酚红,酚红指示颜色非常灵敏,pH值范围为6-8,颜色由黄变为紫红。为了培养方便,能让我们直观地感觉培养液的状况,加入酚红后,如果培养液偏酸,就显示偏黄色,偏碱性则会显示偏紫色。一般来说,污染细菌或者长时间不换液时,培养基变成黄色,主要是因为细菌和细胞过度增长,产生了酸性物质。
生物产业
2024/08/12