关注
已关注
已认证
粉丝量 0
400-860-5168转3328
仪器信息网认证电话，请放心拨打
亚硫酸氢盐修饰后测序法检测甲基化
2019/10/18 16:20
阅读：190
分享：
免费下载
方案摘要：
产品配置单：
亚硫酸氢钠7631-90-5
型号： 克
产地：
品牌： 远慕
面议
参考报价
亚硫酸氢钠溶液(10%)
型号： 500ml
产地：
品牌： 远慕
¥1
参考报价
亚硫酸氢钠溶液(0.5%)
型号： 100ml
产地：
品牌： 远慕
¥1
参考报价
乙二醛亚硫酸氢钠化合物外水合物332360-05-1报价
型号： 50g
产地：
品牌： 远慕
¥1
参考报价
方案详情：
实验目的: 亚硫酸氢盐修饰后测序法主要可用来检测甲基化。
实验原理: 重亚硫酸盐使DNA中未发生甲基化的胞嘧啶脱氨基转变成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不变，用PCR扩增（引物设计时尽量避免有CpG，以免受甲基化因素的影响）所需片段，则尿嘧啶全部转化成胸腺嘧啶。最hou对PCR产物进行测序，并且与未经处理的序列比较，判断是否CpG位点的甲基化状态。
实验材料 :DNA
试剂、试剂盒
NaOH
苯二酚（氢醌）
亚硫酸氢钠
石蜡油
仪器、耗材
离心管
恒温水浴锅
铝箔纸
实验步骤
1.将约2ugDNA于1.5mlEP管中使用DDW稀释至50ul；
2.加5.5ul新鲜配制的3M NaOH；
3. 42℃水浴30min；
水浴期间配制：
4.10mM对苯二酚（氢醌），加30ul至上述水浴后混合液中；（溶液变成淡黄色）
5. 3.6M亚硫酸氢钠（Sigma，S9000），配制方法：1.88g亚硫酸氢钠使用DDW稀释，并以3M NaOH滴定溶液至PH 5.0，最终体积为5ml。这么大浓度的亚硫酸氢钠很难溶，但加入NaOH后会慢慢溶解，需要有耐心。PH一定要准确为5.0。加520ul至上述水浴后溶液中。
6.EP管外裹以铝箔纸，避光，轻柔颠倒混匀溶液。
7.加200 ul 石蜡油，防止水分蒸发，限制氧化。
8.50℃避光水浴16h。
注意事项
避免化学品或外源DNA的污染。
下载本篇解决方案：
细胞不贴壁原因+促进细胞贴壁的方法
消化不够细胞本身就是成团的；若胰酶处理太久，容易造成细胞膜蛋白损伤，使细胞贴壁不紧，显微镜下观察立体感不强，严重的时候甚至会造成细胞死亡。
生物产业
2024/08/21
抗体亲和力从高变低的原因+提高方法
很多亲和力检测技术都需要提前对作用的分子进行标记处理，但标记处理常常会导致分子不是处于真正的原位环境，且可能带来其他无法预测的额外因素，为分子间相互作用的研究增加了难度。因此，无须标记、实时表征结合过程亲和力的测定方法为分子间相互作用研究提供了便捷。
生物产业
2024/08/19
质粒DNA提取时质粒丢失原因+解决方法
质粒提取失败可能由多种因素引起，这些因素可以大致分为三个类别：细菌培养条件、提取操作步骤以及使用的试剂和工具。识别并解决这些问题，有助于优化实验流程，确保质粒DNA提取的成功。
生物产业
2024/08/16
培养基迅速变黄原因+解决方法
培养基的颜色主要来自酚红，酚红指示颜色非常灵敏，pH值范围为6-8，颜色由黄变为紫红。为了培养方便，能让我们直观地感觉培养液的状况，加入酚红后，如果培养液偏酸，就显示偏黄色，偏碱性则会显示偏紫色。一般来说，污染细菌或者长时间不换液时，培养基变成黄色，主要是因为细菌和细胞过度增长，产生了酸性物质。
生物产业
2024/08/12
