兔子白介素1β（IL-1β）ELISA检测试剂盒使用说明书

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    中文名：兔子白介素1β（IL-1β）ELISA试剂盒

    别名：兔子白介素1β（IL-1β）ELISA Kit

    供应商：上海远慕

    规格：48t/96t

    保存：2-8℃

    有效期：6个月

    范围：科研实验等领域科学研究，不得用于临床诊断。

    特点：敏感性高、特异性强、重复性好、试剂稳定、易保存，操作简便。

    用途：用于测定血清，血浆及相关液体样本中相关含量或活性。

    检测种属：大小鼠、人、豚鼠、兔子、猪、犬、牛羊、鸡鸭ELISA试剂盒等种属。

    样本类型：适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞上清、组织匀浆等样本。

    预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中IL-153含量。

    ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。但ELISA测定中影响因素较多，而且其操作中有一定的技术要求，在检测过程中除正常反应外，有时常见到一些错误的结果。

    引起ELISA测定错误结果的原因主要有：

    ①标本因素；

    ②试剂因素；

    ③操作因素。

    兔子白介素1β（IL-1β）ELISA检测试剂盒使用说明书基本原理：

    ①抗原或抗体能吸附到固相载体表面，并保持其免疫学活性；

    ②抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，仍保持其免疫学和酶学活性；

    ③酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。

    兔子白介素1β（IL-1β）ELISA检测试剂盒使用说明书及试剂配制：

    1. 酶联板（Assay plate ）：一块（96孔）。

    2. 标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。

    3. 样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。

    4. 生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

    5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

    6. 生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

    7. 辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

    8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

    9. 浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

    10. 终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

    兔子白介素1β（IL-1β）ELISA检测试剂盒若干特点：

    专一性强：抗原与抗体的免疫反应是专一反应，而免疫酶技术以免疫反应为基础，所检测的对象是抗原（或抗体），使用的抗体除标记了酶以外，与普通抗体的免疫反应特性并无多大差别。

    灵敏度高：由于抗体联结上了酶，因此，借助于酶与底物的显色反应，显示抗原与抗体的结合，大大提高了检测的灵敏性，使检测水平接近放射免疫测定法。

    样品易保存：经过酶反应显示的有色产物大多比较稳定，因此有利于样品的保存。

    兔子白介素1β（IL-1β）ELISA试剂盒操作步骤：

    1、加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50l，待测样品孔中先加样品稀释液40l，然后再加待测样品10l（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

    2、温育：用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。

    3、配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

    4、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

    5、加酶：每孔加入酶标试剂50l，空白孔除外。

    6、显色：每孔先加入显色剂A50l，再加入显色剂B50l，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 分钟。

    7、终止：每孔加终止液50l，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

    8、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

    兔子白介素1β（IL-1β）ELISA试剂盒注意事项：

    1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

    2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

    3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

    4.请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。

    5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

    6.底物请避光保存。

    7.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。

    8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

    9.本试剂不同批号组分不得混用。

    10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

    兔子白介素1β（IL-1β）ELISA检测试剂盒若干特点标本的采集及保存：

    1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃ 后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

    2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

    3. 细胞培养物上清或其它生物标本：1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

    注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

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