人αN已酰氨基葡糖苷酶(αNAG)ELISA试剂盒操作步骤

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    中文名：人αN已酰氨基葡糖苷酶（αNAG）ELISA试剂盒

    别名：人αN已酰氨基葡糖苷酶（αNAG）ELISAKit

    供应商：上海远慕

    规格：48t/96t

    保存：2-8℃

    有效期：6个月

    产品特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的，且与其他相关蛋白无交叉反应。

    产品实验设备：酶标仪， 37℃恒温箱，自动洗板机，可调节移液器以及其吸头，蒸馏水，干净的试管，容量瓶等。

    产品应用领域：本ELISA试剂盒限科研，严禁临床使用。

    特点：灵敏性高、特异性强、重复性好。

    检测原理：采用双抗体夹心ABC-ELISA法。

    人αN已酰氨基葡糖苷酶（αNAG）ELISA试剂盒操作步骤

    人αN已酰氨基葡糖苷酶（αNAG）ELISA试剂盒组织结构：

    1、 血清：操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心23分钟将血红细胞迅速小心地分离。

    2、 血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心60分钟去除颗粒。

    3、 细胞上清液：1000×g离心32分钟去除颗粒和聚合物。

    4、 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心33分钟，取上清液。

    5、 保存：如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

    αN已酰氨基葡糖苷酶（αNAG）ELISA试剂盒细胞裂解液裂解细胞之前，必须根据以下方向的测定。

    1.贴壁细胞应分离胰蛋白酶和离心后收集（悬浮细胞将离心收集直接）。

    2.洗细胞三次冷PBS。

    3.悬浮细胞在PBS（1×）和细胞受超声处理4次（或≤冷冻细胞-20°C。用温和的混融细胞。3次重复冻结/解冻周期。）

    4.在1500×g离心10分钟在2到8摄氏度去除细胞碎片。

    5.细胞培养上清和其他生物液体在1000×g离心20分钟去除样品颗粒和即刻检测或者商店样品在-20°C或稀释后使用80oC。避免重复冻结/解冻循环。

    人αN已酰氨基葡糖苷酶（αNAG）ELISA试剂盒操作步骤液体类标本：

    包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

    1）血清：

    室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

    2）血浆：

    应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

    3）尿液：

    用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

    4）细胞培养上清：

    检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/ 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并 放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

    5）组织标本：

    切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

    人αN已酰氨基葡糖苷酶（αNAG）ELISA试剂盒操作步骤

    人αN已酰氨基葡糖苷酶（αNAG）ELISA试剂盒说明书问题解析：

    1.试剂的选择：选择优良试剂大家都是知道的，但是在检测之前还应该提前半个小时将试剂拿到常温下进行解冻。

    2.加样中可能遇到的问题：在做血清或是血浆用于检测试剂的时候，会碰到血清血浆不好分离的情况，这个时候的解决办法最好是先放在常温中1到2小时，然后在进行离心处理

    3.洗板时容易造成误差： 因为洗板是人工洗的，所以判断什么时候洗干净了也是人为判断的，这个时候带有主观色彩，所以最好多清洗几次，还有就是在洗的时候孔与孔之间的液体容易交叉流动

    人αN已酰氨基葡糖苷酶（αNAG）ELISA试剂盒操作步骤：

    1. 每孔分别加入已稀释的样品、标准品各100ul。

    2. 将板置于37℃温育30分钟。

    3. 甩尽板中液体，用应用洗涤液进行洗涤，每次停留30秒，在纸上拍干。重复操作5次。

    4. 每孔加入酶标偶合液100ul。

    5. 将板置于37℃温育30分钟。

    6. 甩尽板中液体，用应用洗涤液进行洗涤，每次停留30秒，在纸上拍干。重复操作5次。

    7. 每孔加底物A、底物B各50ul，置37℃恒温箱反应15分钟。

    8.每孔加终止液50ul，于450nm波长读O.D.值。

    人αN已酰氨基葡糖苷酶（αNAG）ELISA试剂盒注意事项，：

    1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

    2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

    3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

    4.请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。

    5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

    6.底物请避光保存。

    7.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。

    8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

    9.本试剂不同批号组分不得混用。

    10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

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