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RNA提取浓度过低的主要原因+解决方案
样本在处理过程中可能没有充分裂解,导致RNA产量低。例如,样本量过多或过少、裂解液用量不足、研磨不充分等都会影响RNA的提取效率。
生物产业
2024/08/05
提取的RNA总是降解? 这样解决!
RNA提取是很多科研实验中非常重要的前置环节,获得一个完整的RNA才能为下游各类实验奠定坚实的基础。为了确保RNA的完整性,从样品采集到提取RNA,我们会采取很多手段保护其不受降解
生物产业
2024/06/17
储备液和工作液,标准品的各种形态分辨方法
色谱分析实验中,标准品使用方式灵活多样:(少量纯品配制成)低浓度标液直接使用、(纯品配制成)高浓度标准溶液稀释使用。我们在实验室天天接触,熟悉却不一定了解它们。一支标准品从原液或纯品形态“变身”为直接使用的形态,通常会经历标准品→储备液→工作液阶段,不同阶段的有效期也不同。
生物产业
2023/12/19
做微生物实验的准备步骤
准备工作,培养基的配制及灭菌(121-126度灭30分钟高压蒸汽式灭菌),玻璃器皿的灭菌(170度灭2小时干热灭菌,也可用湿热灭菌)若量大可加长灭菌时间。
生物产业
2023/12/06
流式细胞术实验步骤
流式细胞术(flowcytometry,FCM)是一种综合应用光学、机械学、流体力学、电子计算机、细胞生物学、分子免疫学等学科技术,使被测溶液流经测量区域,并逐一检测其中每一个细胞的物理和化学特性,从而对高速流动的细胞或亚细胞进行快速定量测定和分析的方法。
生物产业
2023/12/01
TRIZOL提取RNA详细步骤,助力科研!
Trizol试剂的主要成分是苯/酚。苯/酚的主要作用是对细胞进行裂解,从而使细胞当中的蛋白质以及核酸物质解聚而得以释放。苯/酚虽然可以有效的使蛋白质变性,但它不能完全抑制RNA酶的活性,因此Trizol中还加入了8-羟基喹/啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase(即RNA酶)。 Trizol试剂不但可用于小量样品(组织:50-100mg;细胞:5×106),也可用于大量样品(组织≥1g或细胞≥107),对动物、植物、细菌、血液提取都适用,可同时处理大量不同样品。反应迅速,提取的总RNA没有DNA和蛋白质污染,可用于Northernblot、RT-PCR、RNase保护分析等。
生物产业
2023/10/19
RNA抽提的窍门与提高得率分享
抽提方法的优化。基于苯酚的方法的最大问题是分层不彻底和部分 RNA 的丢失(不能全部将上清取出)。分层不彻底是因为核酸和蛋白质含量高,可以用增加裂解液使用量或者降低样品量解决。脂肪组织要增加一步氯仿抽提。RNA 的丢失可以用反抽方法或者去除有机层后再离心的方法降低。基于柱离心式方法的最大问题是样品过量。
生物产业
2023/09/15
标准品常见的容器取用方法
标准品一词常作为泛称。在色谱分析工作中,我们进行样品理化分析时常用的标准品大多属于“化合物纯度/浓度标准品”。此时,“标准品”这一称呼涵盖了非医药行业常说的“标准物质”、“标准样品”以及医药行业常说的“中药对照品”、“化学对照品”等。
生物产业
2023/09/04
少量标准品的称量和溶解步骤
有些标准品非常昂贵,厂商只能以非常小的包装提供给客户,如1mg5mg10mg等,拿到产品时可能会觉得瓶子是空的,这种情况是由于粉末状的物质会分散在瓶壁和盖子上,而液体状物质会在瓶壁形成一层可能看不见的液层。
生物产业
2023/08/15
几种常用的免疫学技术知识简介
免疫学技术:是指在免疫学长期发展过程中形成的一套独特的研究手段和计数,包括人工免疫防治技术(疫苗和血清)和免疫检测技术(抗原抗体检测和机体免疫功能检测) 免疫学研究涉及到的重要技术包括:单克隆抗体技术、T细胞克隆技术、转基因及基因编辑技术、分子杂交技术、聚合酶链反应技术等。
生物产业
2023/08/09
免疫核糖核酸的制备及鉴定实验
实验原理 iRNA是用某种抗原免疫动物后,从免疫动物的免疫活性细胞中提取出来的RNA。它具有传递相应抗原特异性免疫信息的能力,因而注入体内后,可发挥对该抗原的免疫清除作用。 iRNA的免疫学作用机理目前尚无定论,一般认为iRNA具有直接模板作用,即iRNA以mRNA的形式在受体细胞中起模板作用,从而合成与免疫反应有关的蛋白质,使正常非致敏的淋巴细胞转变成致敏淋巴细胞。另外,也有人认为iRNA具有逆转录作用、免疫调控作用及“超抗原”作用等。
生物产业
2023/07/27
从冻存的细胞提取RNA操作步骤
一般情况下提取的RNA已经足够,而且在逆转录过程中RNA的质量要远较RNA的数量更重要,一般仅取上清的上1/2左右足矣,这样可最大限度避免对于中间蛋白相的扰动
生物产业
2023/07/04
提取RNA时如何去除DNA的污染
注意事项: 从少量样品(1-10mg组织或102-104细胞)中提取RNA时可加入少许糖原以促进RNA沉淀。例如加800ml TRIzol匀浆样品,沉淀RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来,糖原浓度不高于4mg/ml是不影响第一链的合成,也不影响PCR反应。 匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可以保存于75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。 分层和RNA沉淀时也可使用台式离心机,2600×g离心30-60分钟。 预期产量:1mg组织或1×106细胞提取RNA分别为: 肝和脾6-10μg,肾3-4μg,骨骼肌和脑组织1-1.5μg,胎盘1-4μg,上皮细胞8-15μg,成纤维细胞5-7μg 。
生物产业
2022/10/10
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