进口ELISA试剂盒的反应步骤

    在建立进口ELISA试剂盒方法作反应动力学研究时，实验表明，两次抗原 抗体反应一般在37℃经1-2 小时，产物的生成可达顶峰。为避免蒸发，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，反应板不宜叠放，以保证各板的温度都能迅速平衡。应注意温育的温度和时间应按规定力求准确。由于公司的 试剂盒温育是在空气浴中完成，采用水浴会造成值偏高或花板。另外温育中还有边缘效应，边上的值会偏高，建议为了客观的判断结果，将质控放在非边缘位置。96孔酶标板结构特别；易产生边缘效应，抗原抗体结合及酶促反应对温度有严格要求，酶标板周围与内部孔升降温速率不同，造成周边与内部孔结果差异；干浴与水浴存在明显的差异，尽可能使用水浴，并要求固相板放入水中，减少受热不均，贴密封膜，防止污物浸入。

    洗涤在ELISA试剂盒过程中虽不是一个，但却决定着实验的成败。ELSIA试剂盒就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，而在洗涤时应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。可以说在ELISA 操作中，洗涤是最主要的关键技术，应引起操作者的高度重视，操作者应严格按要求洗涤，不得马虎。

⑴ 严格按照试剂说明书进行操作。操作前将试剂在室温下平衡30～60min。

⑵ 加样后及时放人孵箱。标本较多时，要分批操作。按说明步骤严格控制操作时间，防止孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底。

（3）封板温育时，各孔一定要封严，防止阳性标本的液体蒸发，产生周边现象从而导致“花板”的出现。

（4）用洗板机洗板时，保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后最好在吸水纸（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干：还要防止针口有纤维蛋白或异物，进口ELISA试剂盒这些异物在洗板的过程中易产生拖带现象而导致“花板”的出现。

（5）合理安排检测量，以免反应板过多造成洗板等待时间长。

（6）加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。

（7）显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用。

（8）加样时保持显色剂不外流；A、B液应避免接触金属器械。加终止液时应避免产生气泡。

（9）应保证酶标板清洁，整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸。进口ELISA试剂盒以上的措施可以使“花板”降至最低限度。从而提高检测的特异性。并得到更准确、可靠的实验结果。