四月讲堂 新一代ELISA试剂盒的技术重点

    ELISA实验步骤中的重点及需要特别注意的问题有很多，多加学习与了解会使实验事半功倍。今天我公司为大家整理出了四月讲堂，新一代ELISA试剂盒的技术重点，供大家学习参考。

    一、灵敏度的问题

  通常来说，如果待测样本中目标蛋白的浓度比较高，则对灵敏度要求相对小一些。如果待测样本中目标蛋白的浓度比较低，则必须考虑灵敏度的问题。试剂盒曲线上的最小浓度是比较准确的，低于这个值因为与曲线是个“S"型结构有关，所以结果是有偏差的，是一种估算。再加上实验误差，所以达不到理想的效果。建议选择试剂盒时，应该看曲线上最小的浓度值，而不是试剂盒上写的灵敏度。

    二、检测范围

    1.如果样本中目标蛋白太低，需找相应灵敏度更高的试剂盒来检测或浓缩样本；

    2.如果样本中目标蛋白太高，则需要进一步稀释后进行检测；

    3.不同厂家的试剂盒的检测范围并不相同，一般说来，诊断试剂的检测范围以ng/ml计。而常见的科研试剂盒中的样本中的目标蛋白，范围可随样本的类型而变化。所以实验前应通过文献和预实验的方法确定样本是否在所购试剂盒的范围内，如果不在检测范围内，分两种情况对待。

    三、操作注意

    1.合理安排检测量，以免反应板过多造成洗板等待时间长。

    2.加样时保持显色剂不外流；A、B液应避免接触金属器械。加终止液时应避免产生气泡。

    3.加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。