牛奶中黄曲霉毒素M族检测的固相萃取方法

黄曲霉素是一类真菌 (如黄曲霉和寄生曲霉) 的有毒代谢产物, 具有很强的致癌性。黄曲霉素M1是黄曲霉素B1的羟基化代谢产物，其毒性与黄曲霉素B1相当，也是一种强致癌物。

当奶牛食用了被黄曲霉素B1污染的饲料后，黄曲霉素B1在动物体内会经过转化生成代谢产物黄曲霉素M1。代谢产物黄曲霉素M1一部分随尿液和乳汁排出，另一部分存于动物细胞的可食用组织中； 其中在乳汁中较为常见，因此，检测生鲜乳中黄曲霉素M1指标具有重要意义。

逗点生物采用Copure® 223多功能净化柱，实现了黄曲霉毒素M族的快速检测。建立牛奶中黄曲霉毒素M1和M2的LC检测方法。两个水平（5 ng/g，10 ng/g）的加标回收率均在90-110 %之间，RSD值小于5 %，整体净化效果和回收率优于国内品牌。

本方法操作简便快捷，具有回收率高和除杂效果好的优势，能够作为牛奶中黄曲霉毒素M族检测的参考方法。

参照 《GB 5009.24-2016 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素M族的测定》。

称取 4 g试样于50 mL离心管中，加入10 mL乙腈，涡旋混匀，置于超声波/涡旋振荡器或摇床中振荡20 min，在6000 r/min下离心10 min，取上清液备用。

Copure® 多功能净化柱操作示意图

1）向玻璃试管中加入10 mL样品提取液。

2）将净化柱橡胶头从试管顶端插入试管中，并向下压净化柱至试管底端。

3）将净化柱上部净化后的样品净化液取出至样品瓶或EP管中。

4）取5 mL净化液，氮气吹干，用1 mL初始流动相复溶，涡旋 30s 溶解残渣，过 0.22μm微孔滤膜，上机分析。

Copure® 多功能净化柱，简单高效，快速净化

仪器设备：UltiMate 3000

Thermo Fisher Scientific，配FLD检测器

色谱柱：Agilent ZORBAX  C18

 4.6 mm×250 mm，5 μm

流动相：A：去离子水  B：乙腈-甲醇（50/50）

流动相洗脱条件：A，70%；B，30%

流速：1.0 mL/min

柱温：室温

进样体积：20.0 mL

检测波长：激发波长360 nm，发射波长430 nm

检测器：荧光检测器（FLD）

表1   牛奶中黄曲霉毒素M族加标回收实验结果

从图1中可知，经过Copure® 223多功能净化板净化处理后，提取液中杂质被明显吸附，减少了杂质干扰，净化效果优于国内A品牌；从表1中可知，黄曲霉毒素M1和M2的回收率均在90-110%之间，RSD值小于5 %，能满足实验使用需求。

图1  使用多功能净化板处理前后的色谱图（5ng/g）

①国内A品牌-净化处理  ②Copure®223-净化处理，③牛奶样品-未净化处理