小麦粉中呕吐毒素检测的高通量固相萃取方法

呕吐毒素，也叫做脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol, DON) ，是一种单端孢霉烯族化合物，由于该毒素能够引起动物呕吐等中毒症状， 故而称为呕吐毒素。小麦作为主食作物，是呕吐毒素分布最广的作物之一。

在小麦生产加工的过程中， 呕吐毒素伴随着面粉的制成存在于小麦粉中，严重危及人们的身体健康。因此，精准快速地检测粮食作物及其制成品中呕吐毒素含量，对于保证食品安全具有重要的意义。

图片来源：摄图网

逗点生物采用自主研发的24孔Copure® 230多功能净化板，实现了呕吐毒素的快速、高通量检测。

建立小麦粉中呕吐毒素检测的LC检测方法，LC方法中两个水平（200 ng/g，400 ng/g）的加标回收率均在90-110 %之间，孔间回收率CV值小于5 %。本方法操作简便快捷，具有回收率高和除杂效果好的优势，能够作为小麦粉中呕吐毒素检测的参考方法。

参照《GB 5009.111-2016 食品安全国家标准 食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定 》

1.1  样品提取

1）称取2 g样品，加入20 mL乙腈-水溶液（9+1）混合均匀。

2）涡旋15 min后，6000 r/min离心5 min，取上清液，待净化用。

1.2  样品净化

Copure® 230多功能净化板(货号：COAF230-GTL)

1）将24孔净化板放置在24孔收集板上，再向净化板孔中加入6 mL样品提取液。

2）将24孔净化板和收集板放置在24孔正压提取装置下，开启气阀开关，使净化板孔和输气孔保持对应，匹配良好。

3）调整气体输出压力，使样品提取液过滤至收集板中。

4）取4 mL样品净化液，40℃下氮气吹干，用1 mL初始流动相复溶，涡旋30s溶解残渣，过0.22 μm微孔滤膜，上机分析。

仪器设备：UltiMate 3000，配DAD检测器

（Thermo Fisher Scientific）

色谱柱：Agilent ZORBAX  C18 

(4.6 mm×250 mm，5 μm)

流动相： A：甲醇    B：去离子水  

流动相梯度：见表1

流速：0.8 mL/min

柱温：35℃

进样体积：50.0 mL

检测波长：218 nm

表1  流动相洗脱程序

图1 使用多功能净化板处理前后的色谱图

①小麦粉样品-未净化处理   ②Copure® 230多功能净化板-净化处理 

从图1中可知，经过Copure® 230多功能净化板净化处理后，上机液中杂质被明显吸附，色谱图中杂峰更少，目标峰旁边无干扰峰，定量更准确；24个孔中呕吐毒素的回收率均在90-110%之间，孔间回收率CV值小于5 %，能满足实验使用需求。

表2  LC方法加标回收实验结果

图2 使用Copure® 230多功能净化板净化后

的加标样品色谱图（200 ng/g）

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