AIculture慧养®微生物小课堂 | 食品中金黄色葡萄球菌的检验方法

按照现行的国标方法，金黄色葡萄球菌检测方法分为第一法定性检验、第二法平板计数法(适用于金黄色葡萄球菌含量较高的食品)，以及第三法MPN计数法(适用于金黄色葡萄球菌含量较低的食品)。

第二法/平板计数法

选择性平板采用BP平板，该平板可提前一天配制——洁净台中放置过夜或置于25~50℃培养基中干燥，直到平板表面的水珠消失后备用。该步骤的目的是检查平板是否染菌，最重要的是挥发培养基内部的水分以利于涂布。

每个梯度分别吸取1mL样品匀液，以0.3mL、0.3mL、0.4mL接种量分别接种至3块BP平板上，然后用无菌涂布棒涂布整个平板。如涂布棒不是一次性的，可以提前灭菌备用，也可用酒精灯灼烧2min以上冷却备用。

涂布时尽量涂干，注意不要触及平板边缘。此后将平板静置10min，如样液不易吸收，可将平板放在培养箱36±1℃培养1h。等样品匀液吸收后翻转平板，倒置后于36±1℃培养24~48h(倒置培养的目的在于防止与空气中的细菌交叉污染，还可防止培养基水分挥发太快)，观察结果。

从上三幅图的菌落生长情况可以观察到，10-1稀释度菌落生长杂多，难以计数，最适技术范围为20-200 cfu/梯度，所以10-2稀释度满足计数要求，可疑菌总数在适宜计数范围内，10-3稀释度可疑菌落很少，舍去。

大家从10-2梯度上可以看出，具有沉淀环的菌落很多，需要从这些菌种选择5个或以上可疑菌落进行血浆凝固酶试验，但是这5个菌落该如何选择才能使最终的结果最接近真实值是需要技巧的。

首先可以观察到，平板上的可疑菌落沉淀环有两种，一种是和菌落有点距离的沉淀环 (姑且称为晕环后可知此菌为干扰菌-表皮葡萄球菌)，一种是从菌落边缘直接延伸出来的沉淀环 (姑且称为晕圈)根据经验，将所有有晕环的菌落出来，也将所有有晕圈的菌落数出来，同时判断可疑菌落是两类不同的菌。根据两者菌落数的比例大小决定挑选可疑菌落数的分配情况，比例大的多选，比例小的少选，就是这样的原则。

此次该梯度可疑菌落数为45 cfu。晕环菌落数和晕圈菌落数大概比例在3:2，所以分配数也出来了。选择5个菌落在血平板上划线，同时分别接种BHI培养管，36C1C培养24 h。

根据对样品污染状况的估计，选择3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液)，在进行10倍递增稀释的同时，每个稀释度分别接种 1 mL 样品匀液至 7.5%氯化钠肉汤管(如接种量超过1mL,则用双料7.5%氯化钠肉汤)，每个稀释度接种3管，将上述接种物36℃±1℃培养18 h~24h。

用接种环从培养后的7.5氯化钠肉汤管中分别取培养物1环，移种于Baird-Parker 平板36℃±1℃培养，24h~48 h。