动物源性食品中利巴韦林残留量的UPLC-MS/MS分析

利巴韦林，属抗病毒药物，主要用于治疗流感病毒，但在动物中长期使用容易诱导流感病毒变异，已被我国农业部列入兽药禁止使用范畴。目前该种药物主要参照出入境标准《SN/T 4519-2016 出口动物源性食品中利巴韦林残留量的测定》进行检定。逗点生物依据此标准，采用自主生产的PBA净化小柱分别对鸡肉和鸡蛋中利巴韦林残留量进行加标回收验证，在添加水平为2.0 μg/kg时，回收率达80%以上，RSD小于10%，完全满足客户测试要求。

一、样品提取

称取5.0 g样品于50 mL离心管中，加入浓度为1 μg/mL同位素内标利巴韦林-¹³C₅溶液10 μL，加入12 mL 20 g/L三氯乙酸水溶液和2.5 mL乙腈，涡旋混匀30 s，超声10 min，于8000 r/min离心5 min，上清液全部转移至50 mL离心管中，再向样品中加入10 mL 20 g/L三氯乙酸水溶液重复提取一次，合并两次提取液，用三氯乙酸水溶液定容至25 mL，再准确移取5 mL用氨水调节pH至8.5（±0.1）待净化（本实验是采用阴性样本做基质加标实验，故省略酶解步骤）。

二、SPE净化（Copure® PBA, 100 mg/3 mL）

（1）活化：向PBA柱中依次加入3 mL乙腈，3 mL 0.25 mol/L乙酸铵缓冲液（pH=8.5）进行活化。

（2）上样和洗脱：取上述待净化液过柱，控制流速不超过1 s/滴，然后用3 mL 0.25 mol/L乙酸铵缓冲液（pH=8.5）淋洗小柱，弃去全部流出液，抽干小柱，用2 mL 0.1mol/L甲酸水溶液洗脱，抽干小柱，收集全部洗脱液。

（3）上机：取上述洗脱液过0.22 μm PES水系滤膜，供上机分析。

三、标曲配制

采用内标法定量，分别精密量取适量的利巴韦林标准溶液和同位素内标利巴韦林-¹³C₅工作液，用0.1 mol/L甲酸水溶液配制成适当浓度的标准工作溶液。

四、仪器条件

4.1 色谱条件

仪器：UPLC-MS/MS（Thermo Fisher TQS Endura）

色谱柱：CS2211003H（HILIC，2.1 mm×100 mm，3 μm）

流动相：A：5 mmol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）  B：乙腈

洗脱方式：梯度洗脱，见表1

流速：0.4 mL/min            柱温：30 ℃            进样量：2 μL

4.2 质谱条件

离子源：HESI            电喷雾电压：3500V

鞘气压力：40 arb         辅气压力：1 arb

离子传输管：300 ℃      辅气温度：400 ℃

五、实验结果

六、订购信息