人宫颈癌细胞，SiHa细胞

人宫颈癌细胞，SiHa细胞 SiHa 贴壁上皮细胞

（1）细胞背景

该细胞来源于一位日本病人的手术切除的肿瘤组织。电镜下可以看到细胞间典型的桥粒和细胞质中大量的张力丝。1975年发现有支原体污染，而后被去除。该细胞整合有HPV16基因组，每个细胞中有1~2个拷贝。

（2）客户自备试剂

1）PBS

2）DMEM（高糖）培养基+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3）0.25% （W/V）胰蛋白酶（含0.02% EDTA）

（3）细胞背景

1）生长方式：贴壁

2）种属：Homo sapiens 人

（4）培养条件

1）培养基：DMEM（高糖）培养基+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2）温度：37.0°C

3）气体:空气 95%，CO2 5%

（5）培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml培养液继续培养。

 如果细胞已长满（达80-90%）。即可进行传代，具体步骤如下：

1）弃去培养液，用PBS洗1-2次。

2）向瓶内加入1.0-2.0ml胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有6ml 含10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3）加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4）传代比例：1:2-1:3

（6）常见问题及解决方案

1）培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2）细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

公司细胞的简洁信息：

（1）储存：液氮。

（2）运输：干冰。

（3）用途：只可用于科研。

（4）第二代培养末期液氮冻存。

（5）人宫颈癌细胞，SiHa细胞每冻存管细胞数：>5×105 cells/1ml。

（6）不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

收到人宫颈癌细胞，SiHa细胞后的处理：

1）收到细胞后，首先观察瓶身是否完好（注意有无缝隙，裂痕）。

2）显微镜下观察细胞的生长状况，有无细胞漂浮。

3）用新洁尔灭消毒瓶口及瓶身。

4）打开瓶口，再次用新洁尔灭消毒瓶口（可能会有液体溢出，注意不要碰到液体），酒精灯烤瓶口消毒。

5）将培养液转移至50ml离心管或广口瓶中（若细胞漂浮严重，离心培养基，1000g*5分钟，将离心后的培养基转移至另一个大离心管中，留一点吹打细胞沉淀成悬液，回收细胞至原培养瓶），若漂浮不严重，亦离心一下。

6）在原培养瓶中留一部分原装培养液，再补加自己新配的培养基至适当容积，例如4ml，让细胞适应一下环境。  当细胞长到70-80%，冻存大部分，小部分传代。

A86840 邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯 ，规格： 10毫升 ，保存条件： 保存：-20℃

A86841 癸二酸二（2-乙基己基）酯 ，规格： 50毫升 ，保存条件： 保存：-20℃

A86842 癸二酸二乙酯 ，规格： 5克 ，保存条件： RT

A86843 丁二酸二乙酯 ，规格： 25克 ，保存条件： RT

A86844 顺丁烯二酸二甲酯 ，规格： 100克 ，保存条件： RT

A86845 丙二酸二甲酯 ，规格： 1克 ，保存条件： RT

A86846 邻苯二甲酸二甲酯 ，规格： 25克 ，保存条件： RT

A86847 对苯二甲酸二甲酯 ，规格： 100克 ，保存条件： RT

A86848 癸二酸二甲酯 ，规格： 25克 ，保存条件： RT

A86849 邻苯二甲酸二壬酯 ，规格： 100克 ，保存条件： RT

A86850 邻苯二甲酸二正辛酯 ，规格： 500克 ，保存条件： RT

A86851 癸二酸二正辛酯 ，规格： 100克 ，保存条件： RT

A86852 乙酰乙酸乙酯 ，规格： 500克 ，保存条件： RT

A86853 正庚酸乙酯 ，规格： 25克 ，保存条件： 2～8℃

A86854 月桂酸乙酯 ，规格： 100克 ，保存条件： 2～8℃

A86855 正辛酸乙酯 ，规格： 100毫克 ，保存条件： 2～8℃

A86856 油酸乙酯 ，规格： 500毫克 ，保存条件： 2～8℃

A86857 硬脂酸乙酯 ，规格： 100克 ，保存条件： RT

A86858 对甲苯磺酸乙酯 ，规格： 1公斤 ，保存条件： RT

A86859 三乙酸甘油酯 ，规格： 100克 ，保存条件： RT

A86860 油酸甘油酯 ，规格： 1公斤 ，保存条件： RT

A86861 三油酸甘油酯 ，规格： 100克 ，保存条件： RT

A86862 乙酸正辛酯 ，规格： 1公斤 ，保存条件： RT

A86863 聚（1，4-丁二醇丁二酸）酯 ，规格： 50克 ，保存条件： RT

A86864 聚乙烯乙酸酯 ，规格： 50克 ，保存条件： RT

A86865 碳酸丙二醇酯 ，规格： 50毫克 ，保存条件： 保存：-20℃

A86866 肉豆蔻酸异丙酯 ，规格： 100毫克 ，保存条件： 保存：-20℃

A86867 丙酸正丙酯 ，规格： 5克 ，保存条件： RT，避光

A86868 硼酸三正丁酯 ，规格： 25克 ，保存条件： RT，避光

A86869 亚磷酸三丁酯 ，规格： 100克 ，保存条件： RT

A86870 磷酸三乙酯 ，规格： 25克 ，保存条件： 2～8℃，避光

A86871 磷酸三甲酯 ，规格： 25克 ，保存条件： RT，避光

A86872 磷酸三苯酯 ，规格： 20毫克 ，保存条件： 2～8℃

A86873 亚磷酸三苯酯 ，规格： 100毫克 ，保存条件： 2～8℃

A86874 硅酯H-295 ，规格： 500毫克 ，保存条件： 2～8℃

A86875 棕榈油酸甲酯 ，规格： 500毫克 ，保存条件： 2～8℃

A86876 乙酸正丙酯 ，规格： 1克 ，保存条件： RT

A86877 过硫酸铵 ，规格： 5克 ，人宫颈癌细胞，SiHa细胞保存条件： RT

A86878 硫酸铵 ，规格： 50克 ，保存条件： RT

A86879 四庚基溴化铵 ，规格： 100克 ，保存条件： RT

A86880 四丁基溴化铵 ，规格： 250毫克 ，保存条件： RT

A86881 四乙基溴化铵 ，规格： 1克 ，保存条件： RT

A86882 四乙基氯化铵 ，规格： 5克 ，保存条件： RT

A86883 四乙基碘化铵 ，规格： 500克 ，保存条件： RT

A86884 四甲基溴化铵 ，规格： 250克 ，保存条件： RT