QIAGEN-囊泡exosome RNA的完美解决方案

联科生物

2015/05/03 06:12

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exosome是直径约为30-150nm的小囊泡，在30年前被人们所发现。exosome天然存在于所有体液中，包括血液、唾液、尿液和母乳，且其蛋白、RNA和脂肪成分特异，早期的研究认为，exosome执行蛋白运输功能，特异靶定受体细胞，交换蛋白和脂类或引发下游信号事件。直到2007年，研究人员发现exosome也运输核酸，参与细胞间通讯。至此，这种小囊泡才被人重视，并成为热门的研究对象。细胞外微泡，运载RNA（包括mRNA、miRNA、lncRNA）、DNA及蛋白质，为细胞间信号交流起着重要作用。

QIAGEN exoRNeasy Serum/Plasma Kit改进了传统的超速离心微泡分离方法，能够在20分钟内快速纯化得到细胞外囊泡。该试剂盒采用Exosome Diagnostics, Inc.公司的技术，通过离心柱和特制缓冲液，从多达4 ml的预过滤血浆中分离exosomes。之后使用QIAGEN miRNeasy技术分离总RNA。整个实验流程，从血清/血浆样本到RNA产物，只需1小时。

性能优势： exoRNeasy纯化exosomes和其他细胞外微泡与超速离心法相比，不仅速度更快，并且产物纯度更高。扫描电镜显示，虽然这两种纯化技术都能够纯化预期大小的完整的囊泡，但超速离心法的产物还含有很多不符合预期的更小、或其他形状的细胞结构。通过RT-qPCR实验对exoRNeasy纯化的RNA产物和exoEasy分离柱流出液进行分析，结果显示，exoRNeasy的产物包括血浆中所有mRNA，包括细胞外囊泡的miRNA，且不含细胞。

操作流程：从细胞外微泡分离RNA的完整实验包括两步：纯化exosomes和分离RNA。在exosomes纯化步骤，预过滤的血浆（不包含大于0.8 μM的微粒）与Buffer XBP混合，加至exoEasay亲和性膜离心柱上，结合到柱上。使用Buffer XWP洗涤结合在膜上的囊泡，之后使用QIAzol裂解。在RNA分离步骤，在QIAzol洗脱液中加入氯仿，回收水相，将其与乙醇混合。包括miRNA在内的总RNA结合到离心柱上，洗涤三次后洗脱。

产品信息：——囊泡RNA研究完整解决方案：研究方案产品货号目录价纯化来自血清/血浆样本中exosome中的RNA(含miRNA) exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit (50) 77064 26420 exoRNeasy Serum/Plasma Midi Kit (50) 77044 10560 exoRNeasy Serum/Plasma Starter Kit (20) 77023 5790 检测exosome中miRNA产品套装 miScript II RT Kit (12) 218160 1450 miScript Primer Assay (100) 218300 1060 miScript SYBR Green PCR Kit (200) 218073 5380 miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control 219610 560 检测exosome中lncRNA产品套装 RT2 First Strand Kit (12) 330401 2640 RT2 lncRNA qPCR Assay (200) 330701 1590 QuantiNova SYBR Green PCR Kit (500) 208054 2880 检测exosome中mRNA产品套装 RT2 First Strand Kit (12) 330401 2640 QuantiTect® Primer Assay (200) 249900 900 QuantiNova SYBR Green PCR Kit (500) 208054 2880

规格解释：产品货号产品名称规格 77023 exoRNeasy Serum/Plasma Starter Kit (20) 10 次Maxi大抽+ 10 次Midi中抽（样本囊泡RNA量不确定时，建议选择尝试确定初始样本） 77044 exoRNeasy Serum/Plasma Midi Kit(50) 50次；一次最大抽提1ml血浆/血清77064 exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit (50) 50次；一次最大抽提4ml血浆/血清

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