一定要在Lysis Buffer中加入蛋白酶抑制剂,还要加入一定量的磷酸酶抑制剂;加一抗后最好4度过夜,保证抗体有充分的结合时间,因为磷酸化的蛋白只占总蛋白量的极少部分;选择优质的磷酸化抗体,所以要选好的厂商,Novus为全球高端抗体品牌,其磷酸化抗体效果不错;抗体的稀释倍数要优化,可以根据厂商建议进行优化;用含5% BSA的TBST稀释抗体,不要用常见的5% -Fat Milk的TBST;磷酸化蛋白WB时背景也往往较深,所以压片时间要适当,不能太长或过短,太长则背景太深盖住想要的那条条带,时间过短则可能没有条带或者条带太浅.;磷酸化蛋白WB时,用TBST洗时也要注意一下,摇床的转速不要太快,洗的时间不要太长,孵育一抗和二抗之后分别洗5min 3次即可,宁愿背景深一些,总比做不出来强得多.另外,洗的时候,最好不要把几张膜叠在一起洗。 |
阅读原文:http://www.liankebio.com/TechServiceShow/articleID/2014110030.html
更多
QIAcuity数字PCR如何实现拷贝数变异的精准检测
厂商
2023.07.24
五一劳动节放假通知及服务保障
厂商
2024.05.11
【新品速递】12款新品已上架,火爆热卖ing
新品
2024.07.19
马尔文帕纳科科技奖 | 分享你的研究成果赢取2000欧元!
厂商
2024.07.23