植物DNAout提取试剂盒说明书

植物DNAout

Plant DNAout

产品及特点

植物DNAout 是根据经典的方法改良得到的专门用于提取新鲜或冷冻植物组织基因组DNA(包括叶绿体DNA和线粒体DNA)的试剂盒。

1. 操作快速， 整个过程在30分钟内即可完成。

2. 纯度高，A260/A280在1.9左右， 可直接用于PCR、酶切、杂交等分子生物学实验。提取得到的DNA大小在30-50Kb之间。

3. 产率高，高于大多数同类产品(尤其是基于离心柱的提取产品)。

4. 安全无毒，本试剂盒对人体无毒，无腐蚀性和刺激性气味。

规格及成分

    成   份100次包装250次包装溶液A80 mL200ml溶液B40 mL100mlRNase A溶液(10mg/mL) 1.5 mL3.75ml使用手册1份1份

运输及保存

常温运输及保存，RNase A溶液4℃保存，有效期一年。

自备试剂

氯仿、异丙醇、75%乙醇、TE

使用方法

注意：溶液A和溶液B容易产生沉淀，溶液B比较粘稠，用前均需要放置在65℃预热使沉淀溶解、粘稠度降低，用前充分摇匀。

1. 65℃预热溶液A，待其沉淀溶化后，充分混匀，取0.75 mL加入到10-15 mL塑料离心管（常用于培养细菌用）中并放置于65℃待用。

2. 称取植物组织0.1-0.3g左右，剪成微小的碎片，转移到装有溶液A的离心管中短暂匀浆。匀浆过程中将产生大量泡沫，属于正常现象。也可以液氮研磨后将粉末加入到预热的溶液A中(建议不要在陶器或玻璃研钵中破碎细胞，因为其中的主要成分二氧化硅会非特异地吸附DNA，降低DNA回收量。但可以在塑料研钵中研磨)。

3. 将匀浆液(包括植物碎片)全部转移到新的1.5mL塑料离心管中。注意：匀浆液较为粘稠，可将1 mL枪头剪去一截后用于转移匀浆液，不能吸取的植物碎片可倒入。

4. 在匀浆液中加入0.5倍体积 65℃预热的溶液B，颠倒数次混匀。由于溶液B比较粘稠，可以将1 mL 枪头剪去一截再吸取。

5. 加入15 μL的RNase A溶液（10 mg/mL）。

6. 65℃放置3-5分钟。如果室温放置，DNA产量会降低10-20%。

7. 加入200 μL自备氯仿，震荡器上充分震荡混匀30秒。

8. 12000-15000 g室温离心2分钟，此时两相交界面将有白色膜状物，小心转移上清液到一个新的1.5 mL塑料离心管中，避免触及中间层的白膜。

9. 加入1倍体积(约750 μL)的自备的异丙醇到上清液中，盖紧盖子后用手上下颠倒30秒混匀。此时一般将有絮状DNA沉淀出现。

10. 12000-15000 g室温离心3分钟。此时管底将有微小DNA沉淀，小心弃上清，注意不要丟弃DNA沉淀。

11. 在离心管中加1 mL 75%乙醇，短暂震荡，12000-15000 g室温离心3分钟，弃上清。

12. 重复上述操作一次。

13. 短暂离心，小心吸弃残留的液体（此步不要省略，否则残留的液体含乙醇将会影响DNA电泳、酶切和PCR等反应），室温晾干。

14. 加入50-100 μL自备的TE缓冲液充分溶解DNA沉淀。直接取5-10 μL电泳检测DNA，其余放冰箱备用。