内皮素放免药盒说明书

内皮素放免药盒促销说明书
(Endothelin RIA Kit )
一、概述
内皮素（endothelin，ET）是一种首先由猪的血管内皮细胞中分离纯化出的21个氨基酸组成的生物活性多肽，人的ET有三种基因表达，即ET-1、ET-2、ET-3，其中以ET-1活性最强。内皮素具有强烈的收缩冠状动脉，肾小动脉、刺激心钠素（ANP）的释放，提高全身血压，抑制肾素释放等作用，它是迄今为止已知最强的收缩血管物质。现有研究表明，ET浓度与心血管疾病、呼吸系统疾病、消化系统疾病、神经系统疾病以及妇产科疾病的发生发展均有密切联系。
二、药盒组成及配制（常温运输，4℃保存）
1.缓冲液1瓶：用蒸馏水稀释至50ml。
2.ET-Ab 1瓶（冻干品）：用前加缓冲液__6 ml溶解（如不填写，100管药盒用PBS 10.5ml溶解，50管药盒用PBS 5.5ml溶解）。
3.125I-ET1瓶（冻干品）：100管药盒用前加PBS 10.5ml，50管药盒加PBS 5.5ml（约1.5万cpm/100μl）。
4.ET标准品5瓶：用前加PBS 1.5 ml溶解，浓度为20、60、180、500、1000pg/ml。（如不填写，加1mlPBS溶解）。
5.抑肽酶1瓶。
6.10％EDTA二钠1瓶。
7. PR分离剂1瓶。
三、样品收集
1. 取静脉血2ml，注入含10％EDTA二钠30μl和抑肽酶40μl的试管中，混匀，4℃ 3000rpm离心10min，分离血浆（溶血样品影响到测定结果）。如需要可分装2－3份保存，放-20℃，样品可保存2个月，在-70℃以下可存放半年。测定前，使样本置于室温或冷水中复融，再次4℃，3000rpm离心5min，取上清测定。
2.组织样品的处理：取出活组织，吸去血迹，称重，尽快加入生理盐水1ml研磨，制成匀浆。4℃3000rpm离心15min，取上清-20℃以下保存，测定前最好预实验确定样品稀释度。
另外，每种组织的样品非特异结合（U0）可能有差异，每份标本最好单独做一个U0或每组做一个U0。取组织的重量一般在100mg左右为好。
3.尿样品留取：取12小时晨尿（晚7：00-早7：00）事先在容器里放入2ml冰乙酸，量总尿量，取3ml尿煮沸5－10min后-20℃保存。测定前混匀离心4℃3000rpm 5min取上清，调pH值至7.0左右。结果出来后：浓度pg/ml×总尿量÷12小时＝浓度pg/小时。
四、测定方法
本实验采用非平衡法，取聚苯乙烯试管编号，按下表操作：
T
NSB
S0
S1 –S5
U0
U
缓冲液
－
200
100
－
100
－
标准液
－
－
－
100
－
－
样品
－
－
－
－
100
100
抗血清
－
－
100
100
－
100
摇匀4℃24h
125I-ET
100
100
100
100
100
100
摇匀4℃24h
PR试剂
－
500
500
500
500
500
混匀，室温放置20min，3500rpm离心25min，吸弃上清液，在γ计数器上测定沉淀cpm数
注：测定兔血清时，应改用25％PGE500μl做分离剂（离心前，NSB、S0、S1－S5管补加γ球蛋白100μl，样品管补加PBS各100μl，然后再加25％PEG500μl）。测兔血清时最好每个标本做一个
U0。
五、结果计算
以B/T计算NSB、S0结果百分率；以B/ B0计算标准及待测样品结合百分率，在半对数坐标纸上绘制标准曲线，并查出样品值。或由自动γ计数器预先编制程序，直接给出有关参数，标准曲线及样品浓度。
六、本试剂盒主要技术指标
1.NSB：<6％。
2.灵敏度：5pg/ml。
3.可测范围：20－1000pg/ml。
4.批内变异CV：<10％。
批间变异CV：<15％。
5．特异性：本抗体与α-人心钠素，降钙素基因相关肽（CGRP），血管紧张素Ⅰ、Ⅱ以及舒血管肠肽（VIP）等均无交叉反应。
七、正常血浆参考值
X±SD＝50.8±7.58pg/ml。
各实验室应该根据自己的条件建立自己的正常对照组。
八、注意事项
1.本药盒有效期一个月内使用。
2.PR试剂在使用前需充分混匀，必要时边加边混，不可冰冻保存。
3.为了提高测量灵敏度，本药盒B0/T％略低，但不影响曲线和测定结果。
4.标记品不要提前配置，请在需要加标记的当天配置。
5.用户如遇特殊情况，收到药盒后不能在当月使用，请您将标准品、抗血清低温保存，缓冲液、分离剂、抑肽酶4℃保存，10％EDTA二钠室温保存，若出现沉淀，加热即可溶解。待下次只单购一瓶品即可。
6.药盒内任何一种试剂均可单独购买。
参 考 文 献
1.Biochem Biophys Res Commun 1989:161(1):562.
2.解放军医学杂志.1991.16（6）：403.
3.中华肾脏病杂志.1992.8（3）：410.
4.中华医学杂志.1993.73(7):400.
5.心肺血管学报.1992.11（4）：204.
6.解放军医学杂志.1992.17(2):159.
7.中华医学杂志.1992.72（4）：201.
8.国外医学临床化学与检验学分册.1993.14（1）：6.
本月药盒参考数据：
NSB
S0
S1
S2
S3
S4
S5
B/B0%
3.6
65
90
83
61
35
13
生产日期：2006年10月25日
有效日期：2006年11月25日
质 检 员：