本药盒仅限于
科学研究用
碘[125I]骨钙素放射免疫分析药盒说明书
【试剂盒名称】
通用名称:碘[125I]骨钙素放射免疫分析药盒
英文名称:Iodine[125I]Osteocalcin Radioimmunoassay kit
汉语拼音:Dian[125I]gugaisu Fangshemianyifenxi Yaohe
【适应症】
概述及临床意义:骨钙素(Osteocalcin)又称骨γ-羧基谷氨酸蛋白(Boneγ-carboxyglutamic acid BGP),为骨组织中一种非胶原蛋白质,是成骨细胞产生的一类多肽物质。研究表明,血清BGP浓度变化对临床上骨疾病以及某些内分泌代谢性骨病发病机理研究有着重要的意义。
测定原理:利用液相竞争抑制原理,采用平衡法对样品进行测定。待测样品或标准与限量的抗血清及标记抗原加在一起进行竞争性结合反应,反应完全后,加入免疫分离剂,分离出抗原-抗体复合物,测定复合物的放射性(B),计算各标准管的结合率(B/B0﹪)。作出标准曲线,查出样品浓度。
【成份】
药盒组成及配制
1. 缓冲液(PBS):1瓶(液体),10ml,用前加蒸馏水稀释至50ml。
2. BGP标准品:5瓶(白色,冻干粉):用前每瓶加缓冲液_____ml溶解,(如不填写,每瓶加1ml溶解)浓度为1,2,4,8,16ng/ml。
3. BGP抗血清:1瓶(白色,冻干粉):用缓冲液_____ml溶解(如不填写,100T药盒加10.5ml溶解, 50T药盒加5.5ml溶解)。
4. 125I- BGP:1瓶(白色,冻干粉):用缓冲液_____ml溶解(如不填写,100T药盒加10.5ml溶解, 50T药盒加5.5ml溶解)。
5. PR分离剂:1瓶(液体),100T药盒60ml,50T药盒30ml,使用前充分摇匀,直接使用。
样品收集
1、血清:取静脉血2ml,注入试管待凝固后,4℃3000rpm离心,10min,分离血清。放-20℃,样品可保存2个月,在-70℃以下可存放半年。测定前使样本置于室温或冷水中复融,再次4℃3000rpm离心,5 min,取上清测定 。注:测定兔血清时,应改用25﹪PEG 500μl作分离剂,离心前NSB、S0、 S 1– S5管补加γ球蛋白100μl,样品管加PBS各100μl,然后再加25﹪PEG 500μl。测兔血清时最好每个标本做一个U0,25﹪PEG和γ球蛋白由我公司提供。
2、组织:取出活组织,吸去血迹,称重,尽快加入生理盐水1ml碾磨,制成匀浆, 4℃3000rpm离心,15min,取上清,-20℃以下保存。测定前最好做预实验确定样品稀释度。取3-5份做小样,可将样品做原倍,1:5,1:20倍稀释,选择合适的稀释度。
另外,每种组织的样品非特异结合(U0)可能有些差异,每份标本最好单独做一个U0或每组做一个U0。取组织的重量一般在300~400mg左右为好。
3、 细胞培养液或其它体液:如样品浓度高,可直接加样测定,如浓度低需将样品浓缩5-10倍,再加样测定,可取样品0.5ml,加入测量用的放免塑料管中再冷冻干燥机上冷冻抽干,用0.1ml生理盐水复溶,做为样品管直接测定。
测定方法
本实验用平衡法,取聚苯乙烯试管编号,按下表操作:
BGP RIA加液程序(μl)
试 剂
T NSB
S0
S1-S5
样品 U0
缓冲液
- 200
100
-
- 100
标准品
- -
-
100
- -
待测样品
- -
-
-
100 100
抗血清
- -
100
100
100 -
125I-BGP
100 100
100
100
100 100
充分混匀,4℃放置24h
PR分离剂
500
500
500
500 500
充分混匀,室温放置20min,4℃3500rpm离心25min,吸弃上清,测各管沉淀cpm数。
结果计算
1、以B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/BO计算标准及待测样品结合百分率,在半对数坐标纸上绘制标准曲线,并查出样品值。或由自动γ计数器预先编制程序,直接给出有关参数,标准曲线及样品浓度。
NSB%=(NSB管的cpm数÷T管的cpm数)×100%
Bo%=(Bo管的cpm数-NSB管的cpm数)÷T管的cpm数×100%
B/Bo%=(标准或样品管的cpm数-NSB管的cpm数)÷(Bo管的cpm数-NSB管的cpm数)×100%
2、组织样品得出浓度后,再根据称量取组织量,计算出每mg组织中的量。
主要技术指标
1、NSB:<5%。
2、灵敏度:<1ng/ml。
3、标准曲线范围1~16ng/ml。
4、精密度:批内变异系数2.61% 批间变异系数5.74%
5、BGP抗血清与心钠素、胃动素、甲状旁腺素、降钙素及血管紧张素Ⅱ等均无效叉反应。
正常血清参考值
对118例健康人(无骨质病及代谢性骨病)年龄18~67岁,血清BGP测4.75±1.33μg-L(X±S下同)其中男性58例,测值5.44±1.45μg-L,女性60例测值4.39±0.98μg-L,性别间比较P<0.05,不同年龄血清BGP测定,18~30岁男性测值6.61±1.14μg-L(n=10),20~30岁女性测值4.01±0.91μg-L(n=20),性别间比较P<0.01对50~70岁男性测值3.93±0.46μg-L(n=24),45~60岁女性测值3.90±0.37μg-L(n=32),性别间比较,P>0.05,但与青年人组比较,男性间P<0.01,女性间P>0.05。仅供参考。各实验室应根据自己的条件建立自己的正常对照组。
【放射性核素半衰期】
碘[125I]物理半衰期(T?):60天
【注意事项】
1、使用本药盒的实验室应具有“放射性同位素使用许可证”,使用过程中产生的放射性废物应按国家有关规定处理
2、PR试剂在使用前需充分混匀,必要时边加边混,不可冰冻保存。
3、如果用户测定的样品是兔血清,请在订药盒时提前告知。
4、标记品不要提前配制,请在需加标记的当天配制。
5、用户如遇特殊情况,收到药盒后不能在当月使用,请您将标准品、抗血清冷冻保存,缓冲液、分离剂4℃保存,待下次只单购一瓶标记即可。
6、药盒内任何一种试剂均可单独购买。
7、本药盒每月快件寄出,一般在月底寄下月产品,用户请在每月20日前通知我们,以便及时寄出。
【贮藏】
常温运输,4℃保存
【有效期】
45天
【执行标准】
放射免疫分析基本原理
本药盒提供给医疗科研单位、高等医学院校及各大医院做科学研究用,可用于人及各种动物血样、尿液、组织匀浆及各种体液的测定。
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