细胞增殖与细胞毒检测试剂盒（MTT法）

细胞增殖与细胞毒检测试剂盒（MTT法）
产品简介
　　噻唑兰（Methylthiazoletetrazolium, MTT）是一种可接受氢离子的淡黄色唑氮盐染料，被活细胞线粒体呼吸链中的琥珀酸脱氢酶和细胞色素C还原，使tetrazolium环开裂，生成水不溶的深紫色结晶产物甲簪（formazan）。死细胞因丧失琥珀酸脱氢酶活性，因此甲簪的生成量仅与活细胞数目成正比。在特定溶剂存在的情况下，甲簪可以被完全溶解，借助酶标仪测定570nm波长附近的吸光度，可推算出活细胞的数量或细胞存活率。细胞增殖速度越快，则甲簪生成的量越多，吸光度越高；细胞毒性越大，则甲簪生成的量越少，吸光度越低。由于操作简便，成本低，不污染环境，克服了传统的同位素掺入或释放实验等操作复杂，成本高，对仪器设备和实验室条件要求高，难于防护等因素，而被广泛地用于细胞增殖和细胞毒性的检测。
赛驰生物开发生产的细胞增殖与细胞毒检测试剂盒(Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit) 以MTT为指示剂，在经典操作方法的基础上，采用了独特的甲簪溶解液，可以直接溶解甲簪，而无需离心去除原有的培养液，故可避免因甲簪部分被吸除而引起的操作误差，具有本底低，灵敏度高，线性范围宽，操作简便等特点。
包装清单

保存条件
MTT溶液-20℃保存，一年有效；Formazan溶解液室温或-20℃保存。
使用说明
1. 细胞的增殖和细胞毒实验，一般可在96孔细胞培养板中进行。
2. 每孔加入100微升细胞悬液。细胞的数量取决于实验目的和培养时间。增殖实验每孔通常加入10³个以上数量的细胞；细胞毒性实验每孔至少加入5x10³个或以上数量的细胞(具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素确定)。
3. 接种的细胞按照实验需要，送入细胞培养箱进行培养。增殖实验通常要给予0-10微升特定的药物或生长因子进行刺激。细胞毒实验通常要给予0-10微升抑制因子或细胞毒药物；
4．培养结束后，每孔加入20微升MTT溶液，在细胞培养箱内继续孵育3－6小时；
5．孵育结束后，每孔加入100微升Formanzan溶解液，在37℃细胞培养箱内再继续孵育，直至在镜下观察formazan全部溶解。通常37℃孵育4小时左右，紫色结晶会全部溶解。如果紫色结晶较小较少，溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大较多，溶解的时间会略长。
6. 在570nm测定吸光度。如无570nm滤光片， 560-600nm范围的滤光片均可使用。