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人蛋白激酶A(PKA)Elisa试剂盒说明书

2013/11/04 08:25

阅读：26

应用领域：

发布时间：

2013/11/04

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参考标准：

方案摘要：

人蛋白激酶A(PKA)Elisa试剂盒操作步骤 1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 120pg/ml 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液 60pg/ml 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液 30pg/ml 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液 15pg/ml 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液 7.5pg/ml 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。 4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用 5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7. 温育：操作同3。 8. 洗涤：操作同5。 9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 10 分钟. 10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后15 分钟以内进行。

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