大鼠热休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)免疫组化试剂盒

大鼠热休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)免疫组化试剂盒，以HRP 标记的链霉亲和素复合物（HRP Streptavidin Conjugate，HRP-SA）为基础，可用于检测细胞、组织内的特异性抗原。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。在所用的一抗与相应靶抗原结合后，用生物化二抗与一抗特异性结合，最后加入HRP-SA，形成抗原—特异一抗—生物素化二抗—HRP-SA 复合物，显微镜下观察成像。

试剂盒原理及主要步骤图如下:

大鼠热休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)免疫组化试剂盒，所含试剂：

试剂A 通透液：0.1% Triton-X 100 10 mL（选用）

试剂B 封闭缓冲液（封闭用） 20 mL

试剂C （原装进口分装）已稀释的即用型FVIII 一抗（2.5ml）

试剂D （原装进口分装）生物素化羊抗兔IgG 1 支

（浓度1.5 mg/mL，稀释比为1:300~1:500）50 μL+抗体稀释液20ml

试剂E HRP-SA 复合物1 支（浓度1 μM，稀释比1:50~1:200）100 μL

试剂F DAB 显色液5ml

用户自备试剂：

1． 10mM TBS（pH7.2~7.4）

三羟基氨基甲烷1.21g

氯化钠7.6g

加蒸馏水800mL，浓盐酸调pH 值至7.2~7.4，最后定容至1000mL

TBS-T：TBS+Tween 20（0.05%体积比）

2．抗原修复液（依检测抗原不同而选择不同的修复液）

10mM pH6.0 柠檬酸缓冲液

柠檬酸0.38g

柠檬酸三钠2.45g

加蒸馏水900mL，浓盐酸调pH 值至6.0，最后定容至1000mL

或：0.5M EDTA 修复液（pH8.0）

EDTA·2H2O 186.1g

柠檬酸三钠2.45g

加蒸馏水700mL，用10mM NaOH 调pH 值至8.0，最后定容至1000Ml

3. 缓冲甘油封固剂10 mL

4. Tween 20 5 mL

石蜡包埋组织切片免疫染色

大鼠热休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)免疫组化试剂盒：

石蜡包埋组织切片3~4μm 厚度

1.烤片： 将待做切片置于切片架上，于60℃恒温烤箱中至少烤1 hr；

2.脱蜡： 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10 min；

3.水化： 切片经下行酒精水化，无水乙醇5min，95%乙醇2 次（每次2min），85%乙醇2 min；75%乙醇2min，自来水冲洗，ddH2O 洗2×2min；

4.抗原修复： 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温度达到98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddH2O 洗2×2min，TBS 洗涤（2×2min）（具体修复方法见附1）* 注：有些抗原勿需修复，直接进入第5 步封闭。

5.封闭： 滴加试剂B，37℃湿盒孵育30 min；

6.加一抗：滴加用试剂C（即用型一抗），37℃湿盒孵育2 hr 或4℃过夜；

7.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）；

8.封闭： 滴加试剂B，37℃湿盒孵育10 min；

9.加二抗： 滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗（试剂D），37℃湿盒中孵育30 min；

10.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）；

11.封闭： 滴加试剂Tween 20，37℃湿盒孵育封闭20 min；

12.加HRP-SA： 滴加用抗体稀释液稀释的试剂E（1：50~200，终浓度5~20 nM），37℃湿盒中孵育30 min；

13.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min），TBS 洗涤（2×5 min）；

14.显色：应用DAB 溶液（试剂F）显色；

15.复染：自来水充分冲洗，复染，脱水，透明；

16.封片： 待组织标本干后，用试剂缓冲甘油封固剂封片；

大鼠热休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)免疫组化试剂盒，注意事项：

1. 修复后缓冲液须自然冷却，自来水冲洗后方能把切片取出，骤冷有可能导致结晶或抗原封闭。

2. 缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到，用过的柠檬酸缓冲液不能反复使用。

3. 若试剂为微量浓缩液，用前应低速离心，将内盖和管壁附着的溶液离到底部。

4. 封片前一定要换用TBS 充分洗涤，以便洗去组织上残留的Tween 20，否则会影响结果观察。

5. 如须复染细胞核，则在封片前复染或直接采用含有染核试剂的封片剂进行封片。

附1：

抗原修复方法

常用抗原修复液：柠檬酸缓冲液（0.01M pH6.0）、EDTA 抗原修复液（pH8.0 或9.0）等等。

一、酶消化修复法

切片脱蜡水化处理，TBS 冲洗，在组织上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶，37℃孵育20~30min 后TBS 冲洗即可。

二、微波抗原修复法

微波盒中加入抗原修复液微波加热至沸腾，将脱蜡水化后的切片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，中档或高档继续微波10~15min，取出微波盒冷却至室温后，自来水冲洗，取出切片。因不同微波炉微波处理时间存在差异，须自行调整。

三、直接高压抗原修复法

取修复液于不锈钢高压锅中加热至沸腾，将组织切片置于耐高温切片架上，修复液沸腾后放入切片架，盖上锅盖，待喷气后计时1.5~2.5min 即可脱离热源，自然冷却至室温后自来水冲洗，取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。

四、隔水式高压抗原修复法

不锈钢高压锅中加自来水加热至沸腾，微波盒中加入修复液于微波炉中加热至沸腾，将切片放入微波盒中，再将微波盒放入高压锅中盖上锅盖，待喷气后计时4~8 min 即可关闭热源，自然冷却至室温后自来水冲洗，取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。

以HRP 标记的链霉亲和素复合物（HRP Streptavidin Conjugate，HRP-SA）为基础，可用于检测细胞、组织内的特异性抗原。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。在所用的一抗与相应靶抗原结合后，用生物化二抗与一抗特异性结合，最后加入HRP-SA，形成抗原—特异一抗—生物素化二抗—HRP-SA 复合物，显微镜下观察成像。

大鼠热休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)免疫组化试剂盒：

E-30267 大鼠热休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)免疫组化试剂盒 Rat Heat Shock Protein glycoprotein 96,HSP gp96 ELISA Kit 

E-30268 大鼠血清总补体(CH50)免疫组化试剂盒 Rat 50% complement hemolysis,CH50 ELISA Kit

E-30269 大鼠可溶性CD86(B7-2/sCD86)免疫组化试剂盒 Rat soluble Cluster of differentiation 86,sCD86 ELISA Kit

E-30270 大鼠低氧诱导因子1α(HIF-1α)免疫组化试剂盒 Rat hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α ELISA Kit

E-30271 大鼠胰淀素(Amylin)免疫组化试剂盒 Rat Amylin ELISA Kit

E-30272 大鼠白三烯C4(LTC4)免疫组化试剂盒 Rat Leukotriene C4,LT-C4 ELISA Kit

E-30273 大鼠细胞色素C(Cyt-C)免疫组化试剂盒 Rat Cytochrome-C,Cyt-C ELISA Kit

E-30274 大鼠血管紧张素Ⅰ(Ang-Ⅰ)免疫组化试剂盒 Rat angiotension Ⅰ,Ang-Ⅰ ELISA Kit

E-30275 大鼠黑色素细胞抗体(MCAb)免疫组化试剂盒 Rat melanocyte antibody,MC Ab ELISA Kit

E-30276 大鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)免疫组化试剂盒 Rat dipeptidyl peptldase Ⅳ,DPPⅣ ELISA Kit

E-30277 大鼠过敏毒素/补体片断4a(C4a)免疫组化试剂盒 Rat Complement fragment 4a,C4a ELISA Kit

E-30278 大鼠过敏毒素/补体片断4a(C4a)免疫组化试剂盒 t Complement fragment 4a,C4a ELISA Kit

E-30279 大鼠补体片断5a(C5a)免疫组化试剂盒 Rat Complement fragment 5a,C5a ELISA Kit

E-30280 大鼠补体片断3a(C3a)免疫组化试剂盒 Rat Complement fragment 3a,C3a ELISA Kit

E-30281 大鼠卵泡抑素(FS)免疫组化试剂盒 Rat Follistatin,FS ELISA Kit

E-30282 大鼠组织蛋白去乙酰化酶(HD)免疫组化试剂盒 Rat Histone Deacetylase,HD ELISA Kit 

E-30283 大鼠E选择素(E-Selectin/CD62E)免疫组化试剂盒 Rat E-Selectin ELISA kit 

E-30284 大鼠甲基化酶(Methylase)免疫组化试剂盒 Rat Methylase ELISA Kit

E-30285 大鼠抗增殖细胞核抗原抗体(PCNA)免疫组化试剂盒 Rat proliferating cell nuclear antigen antibody,PCNA ELISA Kit

E-30286 大鼠脂蛋白脂酶(LPL)免疫组化试剂盒 Rat lipoprotein lipase,LPL ELISA Kit

E-30287 大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)免疫组化试剂盒 Rat tartrate-resistant acid phosphatase 5b,TRACP-5b ELISA Kit

E-30288 大鼠葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)免疫组化试剂盒 Rat Glucose-dependent insulin-releasing polypeptide,GIP ELISA Kit

E-30289 大鼠糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)免疫组化试剂盒 Rat Glycogen phosphorylase II,GP-II ELISA Kit

E-30290 大鼠糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)免疫组化试剂盒 Rat Glycogen phosphorylase MM,GP-MM ELISA Kit

E-30291 大鼠糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)免疫组化试剂盒 Rat Glycogen phosphorylase BB,GP-BB ELISA Kit