小鼠β淀粉样蛋白1-42抗体（Aβ1-42Ab）免疫组化试剂盒

小鼠β淀粉样蛋白1-42抗体（Aβ1-42Ab）免疫组化试剂盒以HRP 标记的链霉亲和素复合物（HRP Streptavidin Conjugate，HRP-SA）为基础，可用于检测细胞、组织内的特异性抗原。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。在所用的一抗与相应靶抗原结合后，用生物化二抗与一抗特异性结合，最后加入HRP-SA，形成抗原—特异一抗—生物素化二抗—HRP-SA 复合物，显微镜下观察成像。

试剂盒原理及主要步骤图如下:

小鼠β淀粉样蛋白1-42抗体（Aβ1-42Ab）免疫组化试剂盒所含试剂：

试剂A 通透液：0.1% Triton-X 100 10 mL（选用）

试剂B 封闭缓冲液（封闭用） 20 mL

试剂C （原装进口分装）已稀释的即用型FVIII 一抗（2.5ml）

试剂D （原装进口分装）生物素化羊抗兔IgG 1 支

（浓度1.5 mg/mL，稀释比为1:300~1:500）50 μL+抗体稀释液20ml

试剂E HRP-SA 复合物1 支（浓度1 μM，稀释比1:50~1:200）100 μL

试剂F DAB 显色液5ml

用户自备试剂：

1． 10mM TBS（pH7.2~7.4）

三羟基氨基甲烷1.21g

氯化钠7.6g

加蒸馏水800mL，浓盐酸调pH 值至7.2~7.4，最后定容至1000mL

TBS-T：TBS+Tween 20（0.05%体积比）

2．抗原修复液（依检测抗原不同而选择不同的修复液）

10mM pH6.0 柠檬酸缓冲液

柠檬酸0.38g

柠檬酸三钠2.45g

加蒸馏水900mL，浓盐酸调pH 值至6.0，最后定容至1000mL

或：0.5M EDTA 修复液（pH8.0）

EDTA·2H2O 186.1g

柠檬酸三钠2.45g

加蒸馏水700mL，用10mM NaOH 调pH 值至8.0，最后定容至1000Ml

3. 缓冲甘油封固剂10 mL

4. Tween 20 5 mL

石蜡包埋组织切片免疫染色

小鼠β淀粉样蛋白1-42抗体（Aβ1-42Ab）免疫组化试剂盒（建议方案）：

石蜡包埋组织切片3~4μm 厚度

1.烤片： 将待做切片置于切片架上，于60℃恒温烤箱中至少烤1 hr；

2.脱蜡： 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10 min；

3.水化： 切片经下行酒精水化，无水乙醇5min，95%乙醇2 次（每次2min），85%乙醇2 min；75%乙醇2min，自来水冲洗，ddH2O 洗2×2min；

4.抗原修复： 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温度达到98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddH2O 洗2×2min，TBS 洗涤（2×2min）（具体修复方法见附1）* 注：有些抗原勿需修复，直接进入第5 步封闭。

5.封闭： 滴加试剂B，37℃湿盒孵育30 min；

6.加一抗：滴加用试剂C（即用型一抗），37℃湿盒孵育2 hr 或4℃过夜；

7.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）；

8.封闭： 滴加试剂B，37℃湿盒孵育10 min；

9.加二抗： 滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗（试剂D），37℃湿盒中孵育30 min；

10.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）；

11.封闭： 滴加试剂Tween 20，37℃湿盒孵育封闭20 min；

12.加HRP-SA： 滴加用抗体稀释液稀释的试剂E（1：50~200，终浓度5~20 nM），37℃湿盒中孵育30 min；

13.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min），TBS 洗涤（2×5 min）；

14.显色：应用DAB 溶液（试剂F）显色；

15.复染：自来水充分冲洗，复染，脱水，透明；

16.封片： 待组织标本干后，用试剂缓冲甘油封固剂封片；

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