组织培养再生的步骤

一、接种

组织培养的接种是指将灭过菌的材料，在无菌的情况下，切成小块，放入培养基的过程。科研、生产部门的接种工作，多在无菌室或超净工作台上进行，中学可制作接种箱，在箱内进行接种。接种的方法步骤如下：

1、在无菌室或接种箱中放好接种时所需要的酒精灯、贮存70%酒精和棉球的广口瓶、各种镊子、接种针、解剖刀、手术剪、火柴、培养基等。

2、在无菌室或接种箱内用紫外灯灭菌（无菌室照射20～50分钟，接种箱照射15分钟）。

3、放入已灭菌的接种材料（用培养皿盛取）。同时，操作人员用酒精棉球擦手，并对接种工具用酒精灯火焰烧灼。

4、用手术刀片将材料切割成若干片段，并迅速接种入培养基中。接种时，锥形瓶（或试管）应斜向火焰，在酒精灯火焰附近操作。

5、材料接种好后，将锥形瓶瓶口在酒精灯火焰上转动烧一遍，盖好瓶盖，注明材料名称及接种日期。

材料接种后，应置于26～28℃的培养室中进行培养。

二、植株诱导

本阶段是组织培养中最重要的一环。在培养基中植物激素的作用下，外植体通过三条途径迅速增殖，这就是侧芽增殖、诱导不定芽的形成和诱导胚状体的形成。

1、侧芽增殖

种子植物的每个叶腋中通常都存在着腋芽，在一定条件下可以使它生长。现在知道顶端优势抑制侧芽生长，可被外源的细胞分裂素打破，所以在利用侧芽增殖这条途径时，培养基中几乎都要加入细胞分裂素（有时也加入少量生长素）。由于细胞分裂素的持续作用，侧芽不断分化和生长，逐渐形成芽丛。如果反复切割和转移到新的培养基上继代培养，就可在短期内得到大量的芽。 侧芽增殖的主要优点是能保持遗传的稳定性，因为茎尖的细胞常是均一的二倍体细胞，它不易受培养条件的影响而发生变异，也易于保持嵌合体的性状。目前已有近百种植物可以用这种方法进行繁殖，如草毒（Fragaria ananassa Duch.）、苹果、葡萄（Vitis vinifera L.）、唐菖蒲（Gladiolus gandavensis Houtt.）、非洲菊、月季（Rosa chinensis Jacq.）、甜菜（Beta vulgaris L.）和凤梨（Ananas comosus（L.） Merr.）等。 关于培养基中加入细胞分裂素的浓度，是0.1～10.0毫克/升，一般为1.0～2.0毫克/升。在几种细胞分裂素中用的最多的是6-苄基嘌呤，其次是激动素和异戎基腺苷，玉米素用的很少。 除了细胞分裂素之外，在培养基中还经常加入低浓度的生长素以促进腋芽的生长。常用的生长素是萘乙酸、吲哚丁酸和吲哚乙酸（浓度为0.1～1.0毫克/升）。