如何选择好的ELISA试剂盒

为什么选择ELISA试剂盒？

以TNF-a为例，Meso Scale Discovery? Vplex电化学发光试剂盒以0.04pg/mL的灵敏度是普通ELISA（7 pg/mL左右）的100多倍。如果实验样本中的TNF-a低于7pg/mL,这就意味着实验数据会无法检测，实验没有定量结论。另外一个案例，临床常规测定普通CRP的方法检测线性一般为3~200mg/L，而预测心血管事需要更高灵敏度的CRP，超敏或高敏CRP （hs-CRP）。

ELISA试剂盒检测什么样本？试验周期多长？

1. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

2. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

3. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.

7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

如实验研究周期较长，ELISA试剂盒尽量选择一个批次的，以防止不同批次间的差异。然而由于普通ELISA有效期在3-12个月，而实验周期往往在1-2年以上，一些长期临床实验项目甚至在5-10年，因而经常面临不同批次的挑战。而Meso Scale Discovery?Vplex试剂盒经过54个月稳定性测试。