临床标本的收集和保存

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临床标本的收集和保存

用于

ELISA

测定的临床标本最为常用的是血清（浆）其次为唾液、脑脊液、尿液、粪便

等标本。血清标本测定的标志物为传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物、特种蛋白时，

在处理和保存方面要考虑以下几个方面：

1

）要注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血

红素基团，其有类似过氧化物的活性，故在以

HRP

为标记酶的

ELISA 

测定中，如血清标

本中血红蛋白浓度较高，则很容易在温育过程中吸附于固相，从而与后面加入的

HRP

底物

反应显色［

1

］。

2

）样本的采集及血清分离中要注意避免细菌污染。细菌生长分泌的一些

酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用；此外一些细菌的内源性酶如大肠杆菌的

β

-

半乳

糖苷酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。

3

）血清标本如是以无菌操

作分离，则可在

2

～

8

℃下保存

1

周。如为有菌操作，则建议冰冻保存。样本的长时间保存

应在

- 70

℃以下。

4

）冰冻保存的血清标本须注意避免因停电等造成的反复冻融。标本的反

复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子产生破坏作用，从而引起假阴性结果。

此外冻融标本的混匀亦应注意，不要进行剧烈振荡，反复颠倒混匀即可。

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）标本在保存中

如出现细菌污染所致的混浊或絮状物时，

应离心沉淀后取上清检测。

对用于激素和治疗药物

测定的血清标本的收集，要注意收集时间对测定结果产生影响。如可的松在早晨

4

～

6

点之

间，会有一峰值出现：生长激素、促黄体激素（

LH

）和促卵泡激素（

FSH

）均以阵发性方

式释放，因此，

在测定此类激素时，

有必要在密切相连的时间间隔内采取数份血样本，

以其

中间值为测定值。

此外体位对测定结果亦有影响，

当从卧位变为站立位时，

血清中肾素活性

将出现明显增高。治疗药物的检测，应根据药代动力学选择服药后的最适时间抽血检测。

2  

ELISA

测定中试剂准备

在临床实验室作实验时通常将试剂从冰箱中拿出来即用，而忽略了这种做法有可能影响

后面温育时间不够的问题，其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。因此在

ELISA

测定中试剂准备最关键的是，在实验开始前，将试剂盒先从冰箱中拿出来，在室温

下放置

20

分钟以上后，再进行测定。以使试剂盒在使用前与室温平衡。其目的是在后面的

温育反应步骤中，

使反应微孔内的温度能较快地达到所要求的高度，

以满足测定要求。

其次，

目前的商品

ELISA

试剂盒中的洗板液均需在实验室使用时对所提供的浓缩液稀释配制