一步式广谱DNAout试剂盒实验要点
1.CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之前必须预热。
2.在最适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用苯酚和氯仿的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(苯酚—氯仿—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。一步式广谱DNAout试剂盒小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
一步式广谱DNAout试剂盒注意
1. 对大肠杆菌可从固体培养基上挑取单个菌落直接进行煮沸法提取质粒DNA。
2. 煮沸法中添加溶菌酶有一定限度,浓度高时,细菌裂解效果反而不好。有时不同溶菌酶也能溶菌。
3. 提取的质粒DNA 中会含有RNA,但RNA 并不干扰进一步实验,如限制性内切酶消化,亚克隆及连接反应等。
一步式广谱DNAout试剂盒其它产品信息:
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TC-axbz-190 鳞癌VX-2(兔模型)
TC-axbz-191 鲑鱼胚胎细胞 CHSE
TC-axbz-192 鲑鱼胚胎细胞 RTG
TC-axbz-193 大黄鱼肾细胞 PCK
TC-axbz-194 鼠腹水单核细胞瘤 J774A.1
TC-axbz-195 小鼠IL-3依赖性32D细胞
TC-axbz-196 大黄鱼EPC细胞 EPC
TC-axbz-197 菜青虫卵巢细胞 Pr-HNV8
TC-axbz-198 大鼠胰岛素细胞 INS-1
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TC-axbz-200 小鼠肉瘤 S37
TC-axbz-201 小鼠乳腺 EMT6
TC-axbz-202 C3H小鼠骨肉瘤 LM8
TC-axbz-203 大鼠骨肉瘤 VMR106
TC-axbz-204 猴肾C M145
TC-axbz-205 兔成骨C IF
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TC-axbz-207 大鼠皮层神经元细胞 RN-c
c 大鼠主动脉平滑肌细胞 RSMC
TC-axbz-209 小鼠小胶质瘤细胞 Bv-2
TC-axbz-210 鼠杂交骨髓瘤细胞 K6H6/B5
TC-axbz-211 大鼠脑膜细胞 RMC
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TC-axbz-213 大鼠肝癌细胞 CRL-1548
TC-axbz-214 小鼠T淋巴细胞瘤细胞 Cyc-Tag(S49)
TC-axbz-215 小鼠骨髓细胞 FDC-P1
TC-axbz-216 小鼠垂体瘤细胞 GT1-1
TC-axbz-217 小鼠神经母细胞瘤细胞与大鼠胶质瘤细胞之融合细胞 NG108-15
TC-axbz-218 小鼠胚胎成纤维细胞(来自NIH3T3) PA12
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