柱式昆虫DNAout试剂盒实验要点
1.CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之前必须预热。
2.在最适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用苯酚和氯仿的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(苯酚—氯仿—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。柱式昆虫DNAout试剂盒小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
柱式昆虫DNAout试剂盒注意
1. 对大肠杆菌可从固体培养基上挑取单个菌落直接进行煮沸法提取质粒DNA。
2. 煮沸法中添加溶菌酶有一定限度,浓度高时,细菌裂解效果反而不好。有时不同溶菌酶也能溶菌。
3. 提取的质粒DNA 中会含有RNA,但RNA 并不干扰进一步实验,如限制性内切酶消化,亚克隆及连接反应等。
柱式昆虫DNAout试剂盒其它产品信息:
PA12 小鼠成纤维细胞
RTE 大鼠气管上皮细胞
SF9 昆虫卵巢细胞
SMC 兔主动脉平滑肌细胞
Vero 猴肾细胞
WEHI-3 小鼠血液细胞
Y2 小鼠成纤维细胞
L6 大鼠骨骼肌成肌细胞
NRK 小鼠结缔组织细胞
AtT-20 小鼠垂体瘤
BC3H1, 鼠脑瘤
BV-2 小鼠小胶质瘤细胞
C6 大鼠脑胶质瘤
Cyc-tAg 小鼠T淋巴细胞瘤(SV40T抗原转染)
EL-4 鼠T淋巴细胞瘤
FOX-NY 小鼠淋巴瘤细胞
GH3 大鼠垂体瘤细胞
GT1.1 小鼠垂体瘤细胞(分泌促生长激素分泌激素)
HEPA1-6 小鼠肝癌细胞
MEL 小鼠红白血病细胞
MFC 小鼠前胃癌细胞
MMQ 大鼠垂体瘤细胞
NG108-15 小鼠神经细胞瘤/大鼠神经胶质细胞瘤杂交瘤细胞
P19 小鼠畸胎瘤细胞
PC-12 大鼠嗜铬细胞瘤细胞
RAW264.7 小鼠巨噬细胞瘤
SP2/0-AG14 小鼠骨髓瘤
Yac-1 小鼠淋巴瘤细胞
H-4-II-E 大鼠肝细胞瘤
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