蛋白上样缓冲液实验要点
1.CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之前必须预热。
2.在最适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用苯酚和氯仿的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(苯酚—氯仿—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。蛋白上样缓冲液小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
蛋白上样缓冲液注意
1. 对大肠杆菌可从固体培养基上挑取单个菌落直接进行煮沸法提取质粒DNA。
2. 煮沸法中添加溶菌酶有一定限度,浓度高时,细菌裂解效果反而不好。有时不同溶菌酶也能溶菌。
3. 提取的质粒DNA 中会含有RNA,但RNA 并不干扰进一步实验,如限制性内切酶消化,亚克隆及连接反应等。
蛋白上样缓冲液其它产品信息:
xy-E11394 人血小板相关免疫球蛋白(PAIg)ELISA试剂盒
xy-E11395 人血小板相关补体3(PAC3)ELISA试剂盒
xy-E11396 人血栓素A2(TX-A2)ELISA试剂盒
xy-E11397 人血红蛋白H(HbH)ELISA试剂盒
xy-E11398 人血红蛋白C(HbC)ELISA试剂盒
xy-E11399 人纤维蛋白(Fibrin)ELISA试剂盒
xy-E11400 人血纤肽/纤维蛋白肽B(FPB)ELISA试剂盒
xy-E11401 人纤溶酶原激活剂(PLGA)ELISA试剂盒
xy-E11402 人细胞膜表面免疫球蛋白(SmIg)ELISA试剂盒
xy-E11403 人前白蛋白(PA)ELISA试剂盒
xy-E11404 人硫酸肝素糖蛋白(HSPG)ELISA试剂盒
xy-E11405 人冷球蛋白(CG)ELISA试剂盒
xy-E11406 人红细胞膜蛋白(EMP)ELISA试剂盒
xy-E11407 人高铁血红蛋白(MHB)ELISA试剂盒
xy-E11408 人低分子肝素(LMWH)ELISA试剂盒
xy-E11409 人补体3裂解产物(C3SP)ELISA试剂盒
xy-E11410 人补体片段3b受体(C3bR)ELISA试剂盒
xy-E11411 人补体1抑制物抗体(C1INH)ELISA试剂盒
xy-E11412 人B因子(BF)ELISA试剂盒
xy-E11413 人类白细胞抗原G(HLA-G)ELISA试剂盒
xy-E11414 人补体片断3b(C3b)ELISA试剂盒
xy-E11415 人补体片断4b(C4b)ELISA试剂盒
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