羟自由基检测检测原理:试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被大鼠谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-PX)获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤羟自由基检测用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-PX)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
羟自由基检测需要提供的试剂和器材
37℃恒温箱
标准规格酶标仪
精密移液器及一次性吸头
蒸馏水
一次性试管
吸水纸
羟自由基检测按试剂组成分类
一、单试剂
①优点:操作简便适用于各类生化分析,节约试剂位。
②缺点:配方复杂(稳定剂),稳定性,不能完全避免内外源物质干扰。
二、双试剂
①优点:可较彻底排除样品空白和内外源干扰物,试剂稳定,便于储存,运输和使用,可用抑制法直接测定某些同工酶。
②缺点:多占试剂位。
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