最新Elisa实验稀释问题解析方案

上海纪宁

2015/09/01 09:39

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本月初时，南京中医药大学的张老师第二次购买了我司进口人Elisa试剂盒产品，上次实验在我公司技术员的指导下顺利完成，张老师对我司产品与服务都非常满意。而本次实验中，张老师遇到了一些问题，联系到何经理咨询。

张老师说：“我在网上看到一些帖子说是通过抗原浓度，抗体的稀释倍数，设立梯度来确定效果，可是我想问测的的结果怎么看哪个效果好呢？看了一篇文献他是说OD450值为1左右条件作为最佳条件，很是不解啊，我做的双抗夹心法。"

听完张老师的问题描述后，何经理立即将问题转至技术部。二十分钟后，技术员将问题解析方案整理出：这个确实有好几种因素来确定，双抗夹心的话，有包被抗体的浓度、缓冲液的选择、孵育时间等好几种因素，您要测试最佳的效果，就要控制变量的方法来确定。

一般来说，如果您是夹心法的话主要要用棋盘法确定一抗和抗原的浓度，二抗一般不需要怎么摸条件，您选一到两个说明书上推荐的浓度即可。棋盘法中选OD值在1左右的一抗浓度，(此时，应该有多个1对应的浓度)您要选一个在这个浓度下，测抗原的线性拉得最宽的那一个。如果一抗浓度太高，想要测的抗原基本都可被吸附，这样就达不到灵敏检测的目的；如果一抗浓度太低，OD值比1小太多又会增大误差。另外，抗体稀释液一般就是在洗涤液中加入一定浓度的不相关蛋白。这样可以减小非特异吸附(吐温和蛋白均有此作用)，直接用PBS的话可能会造成阴性OD过高

问题解决后，张老师非常满意，并表示下学期有新的实验课题要做，还会继续来买。非常感谢南京中医药大学张老师对我公司的鼎力支持与认可！我们会竭诚为每一位客户提供优质的产品与服务。