熬和树脂 Chelex 100 sodium form
原代细胞共性
原代细胞现在广泛应用于分子、细胞生物学和生物医学基础研究,如蛋白质组学、基因组学、细胞株(系)研究、DNA、RNA和遗传学研究等,还应用于当今热门的生物医药产业如药物筛选、药物代谢和毒理研究、癌症药物的研究等。原代细胞在生物医药领域有不可替代的作用,市场前景十分广阔。我国原代细胞用于实验才刚刚开始,随着实验要求的提高和全球生物医药研发重心的东移,我国对原代细胞的需求在逐年递增。
除了部分终末分化的细胞,一般的细胞都能传代8-10代及以上,有些细胞甚至更多,但是一般都建议客户采用3-4代以内的细胞。
在原代细胞培养过程中,一般是初次培养过夜后换液,以后每隔2-3天换一次液,以培养液的颜色为标准,一般变黄后就需换液。原代细胞的传代前期一般是3-4天传一次代,后期一般是4-6天传一次代(前期指前三代,后期指三代后)。
四,细胞系(Cell Line) 系由系列传代培养的第一次培养或其中任何阶段培养制备的细胞群(非原始培养细胞)。该细胞群通常是非均质的。
熬和树脂 Chelex 100 sodium form
生产方法:
原料处理 利用右旋糖酐划分液,回收相对分子质量5000-7500的作原料。
脱色、混合 在容器中加水约300ml,加热煮沸后,加右旋糖酐100g,搅拌至全部溶解,补加水配制成100g/L。按右旋糖酐质量配比加30g/L(3%)活性炭,搅拌,煮沸15-30 min,用3号垂熔漏斗过滤,得澄明滤液,放冷至室温。取滤液至适当容器中,在搅拌下加入650g/L(65%)三氯化铁溶液200ml,搅拌均匀,得混合液。
右旋糖[蒸馏水,活性炭]→[煮沸]滤液[FeCl3]→混合液
催化 在100mm×100mm玻璃离子交换柱内,装701苯乙烯型弱碱性阴离子交换树脂,用100 g/L (10%)NaOH做再生剂,是树脂转成阴离子OH型,流出液pH7-8,无氯化物,比电阻在50kΩ/cm以上,供催化反应用。
将再生好的树脂柱内的水位放至树脂界面处,倒入混合液,进行动态催化反应,流出速度控制在15ml/min为宜。当深红色右旋糖酐铁流出时,立即取样检查pH值、氯化物和比电阻,其pH应在8以上,氯化物应为阴性,比电阻在2kΩ/cm以上,合格后收集。当混合液下降到树脂界面时,开始用水洗脱,进水速度控制在和流出速度相同,一般可收集到2-3L流出液。
混合液[701树脂柱]→流出液(右旋糖酐铁)
浓缩 取上述流出液进行减压浓缩,温度45-65℃之间,至1L时停止蒸馏,取样测定含铁量并酌情调节含铁量,使成2.5%。
流出液[40-65℃,减压]→浓缩液
制剂 将配好的溶液,经3号或4号垂熔玻璃漏斗过滤,按灭菌制剂操作,分装,封口,112℃,30min灭菌,即得右旋糖酐铁注射液成品。
浓缩液[112℃,30min]→右旋糖酐铁注射液成品。[1]