交联葡聚糖微球Cross Link Dextran

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使用方法

1. 乙醇浸泡：

在室温下，将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时，并不断搅拌以保证凝胶溶胀，用无盐水洗去残存的乙醇滤干;

2.无盐水浸泡：

室温下，在无盐水中充分溶胀24小时，间隙搅拌，以保证凝胶的完全溶胀，然后；

3. 盐酸浸泡：

在常温下再用0.2N HCl浸泡12小时，间隙搅拌，滤干，水洗至中性；

4. 将溶胀好的凝胶脱气后（真空抽滤或超声波）根据装柱要求一次性置入柱内，注意保持湿态装柱，并避免柱内产生气泡或断层；

5. 上样前平衡层析柱至少3-5 个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止（流出液的PH值等于上柱的Buffer 的PH值）；

6. 凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积，我们建议初次上样控制在1-2%的床体积，视分离情况可以调整；脱盐时上样量可以达到20% 的柱床体积，柱高的选择也与分离要求相关，柱高控制在40-50cm 以下，过高的凝胶层会引起较大的反压，应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制，脱盐时高径比为5：1 即可；

7. 洗脱方法：

可以用无盐水，也可以采用上柱时的缓冲液洗脱；在上柱Buffer 中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以完全分离纯化；

8. 在位清洗（CIP）

凝胶使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。方法是以40cm/h 用1M 氢氧化钠反向洗四个柱体积，再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。

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交联葡聚糖凝胶的商品名，系以右旋糖酐与1-氯-2,3-环氧丙烷(表氯醇)交联制备而成的具有网状结构、水不溶性珠状微粒，用于凝胶过滤。可根据分离物分子量范围选用适当交联度的凝胶，交联度(G)越大，网络孔径越小，在水或盐溶液中溶胀时吸水量越小，适用分离物的分子量范围越窄。按交联度从大到小，依次有G-10、G-15、G-25、G-50、G-75、G-100、G-150、G-200等型号，数字表示干凝胶溶胀时吸水量的10倍，如G-10每1g干凝胶吸水量为1g，余类推。Sephadex具有稳定性好、吸附性小等优点，但可被强酸、强碱或氧化剂破坏降解。广泛用于低压凝胶过滤分离分子量大小不同的化合物。在凝胶上引入羟丙基后具亲脂性，可在有机溶剂中膨胀而用于有机物的分离，如LH-20型葡聚糖凝胶便是G-25型凝胶的羟丙基衍生物。引入极性基团，如羧甲基(-CH2COOH，CM型)、磺乙基(-CH2CH2SO3H；SE型)、磺丙基(-CH2CH2CH2SO3H，SP型)、二乙氨基乙基(-CH2CH2N(C2H5)2,DEAE型)、季铵乙基(-CH2CH2N+(C2H5)2CH2CHOHCH3,QAE型)等则使凝胶具离子交换剂性质，多用于蛋白质、多肽、生物碱等的分离，其表示方法，如DEAE-SephadexA-50即表示由G-50型制备的含DEAE基团的阴离子交换剂，SP-SephadexC-25则为由G-25制备的含磺丙基的阳离子交换剂等。