琼脂糖微球Cl-6BAgarose Beads Cl-6B
使用方法
1. 乙醇浸泡:
在室温下,将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时,并不断搅拌以保证凝胶溶胀,用无盐水洗去残存的乙醇滤干;
2.无盐水浸泡:
室温下,在无盐水中充分溶胀24小时,间隙搅拌,以保证凝胶的完全溶胀,然后;
3. 盐酸浸泡:
在常温下再用0.2N HCl浸泡12小时,间隙搅拌,滤干,水洗至中性;
4. 将溶胀好的凝胶脱气后(真空抽滤或超声波)根据装柱要求一次性置入柱内,注意保持湿态装柱,并避免柱内产生气泡或断层;
5. 上样前平衡层析柱至少3-5 个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止(流出液的PH值等于上柱的Buffer 的PH值);
6. 凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积,我们建议初次上样控制在1-2%的床体积,视分离情况可以调整;脱盐时上样量可以达到20% 的柱床体积,柱高的选择也与分离要求相关,柱高控制在40-50cm 以下,过高的凝胶层会引起较大的反压,应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制,脱盐时高径比为5:1 即可;
7. 洗脱方法:
可以用无盐水,也可以采用上柱时的缓冲液洗脱;在上柱Buffer 中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以完全分离纯化;
8. 在位清洗(CIP)
凝胶使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。方法是以40cm/h 用1M 氢氧化钠反向洗四个柱体积,再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。
琼脂糖微球Cl-6BAgarose Beads Cl-6B
琼脂糖凝胶CL-6B(62610-50-8)的性状: 珠状凝胶颗粒。 由琼脂糖凝胶6B与2,3-二溴丙醇在强碱性条件下共价交联反应而得。 有琼脂糖凝胶6B同样的孔隙度,并大大增加了热稳定性和化学稳定性。 适宜在水相介质pH3~14中应用,在碱性介质中其稳定性特别高。 商品为溶胀微珠悬浮在蒸馏水中,以焦碳酸二乙酯消毒,并加有0.02%叠氮钠作抑菌剂的稠厚悬浮液。 相对密度0.994。琼脂糠6%。 颗粒直径(湿)40~210μm。排阻限多糖1×106、蛋白质4×106。