交联葡聚糖微球

交联葡聚糖微球

    然高分子微球具有良好的应用前景，在医药领域可以用作栓塞材料、药物载体、细胞微载体等。有许多方法可以制备高分子微球，其中反向悬浮聚合法是制备均一微球的一种简单有效的方法。天然高分子材料葡聚糖因其原料丰富，价格低廉、生物相容性好等优点被广泛应用于生物领域。本文采用反向悬浮聚合法制备不同粒径分布的交联型葡聚糖凝胶微球和表面修饰了β-环糊精的葡聚糖微球，并做了简单的应用研究，主要工作如下:
　　采用反向悬浮聚合法制备了不同粒径大小的葡聚糖凝胶微球，以甲基硅油作为油相，改性葡聚糖溶液作为水相，聚甲基乙烯基醚马来酸酐(PMVE-alt-MAH)作为交联剂。通过调节搅拌速度、温度、水油比和交联剂浓度，获得了不同粒径和粒径分布的葡聚糖凝胶微球。通过扫描电子显微镜表征微球的形貌特征，通过光学显微镜表征凝胶微球溶胀后的粒径大小，发现得到的微球表面光滑，粒径分布均一，微球溶胀后的粒径大小由交联剂浓度大小决定，且比一般的葡聚糖微球具有更好的溶胀性能。将获得的不同粒径大小的微球作为微载体进行卵巢癌细胞培养，考察不同粒径大小的微载体对卵巢癌细胞活力及转移特性的影响，发现微载体的大小对卵巢癌细胞的生长和迁移能力具有相关性。
　　在此基础上同样用反向悬浮聚合法制备了修饰有β-CD的葡聚糖凝胶微球，将PVME-alt-MAH侧链修饰上β-CD，溶于水后作为水相，改性葡聚糖作为交联剂。获得的微球通过红外光谱测定特有的基团，通过光镜和SEM观察微球的形貌特征，发现微球表面仍然光滑，粒径分布依旧均一，溶胀性能也没有明显的降低。通过冷冻干燥切片后用SEM观察微球内部结构，发现微球内部稀疏多孔，具有很好的保水性。对微球进行阿霉素载药测试，考察了其载阿霉素盐酸盐量和药物释放效果。再根据修饰了的β-CD的主客体相互作用吸附碘分子，使得微球实现CT显影成像。

交联葡聚糖微球

使用方法

1. 乙醇浸泡：

在室温下，将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时，并不断搅拌以保证凝胶溶胀，用无盐水洗去残存的乙醇滤干;

2.无盐水浸泡：

室温下，在无盐水中充分溶胀24小时，间隙搅拌，以保证凝胶的完全溶胀，然后；

3. 盐酸浸泡：

在常温下再用0.2N HCl浸泡12小时，间隙搅拌，滤干，水洗至中性；

4. 将溶胀好的凝胶脱气后（真空抽滤或超声波）根据装柱要求一次性置入柱内，注意保持湿态装柱，并避免柱内产生气泡或断层；

5. 上样前平衡层析柱至少3-5 个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止（流出液的PH值等于上柱的Buffer 的PH值）；

6. 凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积，我们建议初次上样控制在1-2%的床体积，视分离情况可以调整；脱盐时上样量可以达到20% 的柱床体积，柱高的选择也与分离要求相关，柱高控制在40-50cm 以下，过高的凝胶层会引起较大的反压，应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制，脱盐时高径比为5：1 即可；

7. 洗脱方法：

可以用无盐水，也可以采用上柱时的缓冲液洗脱；在上柱Buffer 中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以完全分离纯化；

8. 在位清洗（CIP）

凝胶使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。方法是以40cm/h 用1M 氢氧化钠反向洗四个柱体积，再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。