光合细菌培养基

光合细菌培养基

 红螺菌培养基：    

1、富集培养基：     

    经典的紫色非硫细菌（红螺菌）的富集培养基的配方为：NH4Cl：0.1g； NaHCO3：0.1g；K2HPO4：0.02g；CH3COONa：0.1~0.5g；MgSO4·7H2O：0.02g； NaCl：0.05～0.2g； 生长因子1ml，蒸馏水97ml，微量元素溶液1ml，pH为7.0。     

    其中，①5％NaHCO3水溶液，过滤除菌取2m1加入无菌培养基中。②生长因子：维生素B10.001mg、乙尼克丁酸0.1mg、对氨基苯甲酸0.1mg、生物素0.001mg，以上药品溶于蒸馏水中，定容至10ml，然后过滤除菌。③微量元素溶液：FeCl3·6H2O ：5mg；CuS04·5H2O：0.05mg；H3BO4lmg；MnCl2·4H2O：0.05mg；ZnSO4·7H2O：1mg；Co(NO3)2·6H2O： 0.5mg。以上药品分别溶于蒸馏水中，并定容至1000m1。    

    除①、②、③外，各成分溶解后100 Pa灭菌20min。然后分别加入①、②、③，如加入0.1％～0.3％的蛋白胨则能促进该菌生长。    

2、分离培养基：     

    传统的红螺科分离培养基的配方为：NH4Cl：0.1g； MgCl2：0.02g； 酵母膏：0.01g； K2HPO4：0.05g； NaCl： 0.2g； 琼脂2g，蒸馏水90ml。100Pa灭菌20min。     

    灭菌后，无菌操作加入经过滤除菌的0.5g/5mlNaHCO3，再无菌加入过滤除菌的0.1g或0.1mlNa2S·9H2O（降低培养基的氧化还原值），最后再加入5ml经过滤除菌的乙醇、戊醇或4％丙氨酸。用过滤灭菌的0.1mol/H3PO3调pH至7.0。   

摘自百度知道。    

    筛选富集培养基为: NH4Cl 1g/L, NaHCO3 1g/L, CH3COONa 3g/L, KH2PO4 0.3g/L, MgSO4 0.1g/L, 酵母膏0.5g/L, 微量元素母液1g, 自然pH值。扩大培养培养基以海水代替微量元素母液。1000~4000lx光照, (30±2)℃恒温培养。  

基础培养基:NH4Cl:1g; Na2HPO4: 0.5g; MgSO4: 0.2g; NaCl: 2g; NaHCO3: 5g; 酵母膏:2g  乙醇2ml，用 0.1N H3PO4调至pH7.0。  

划线培养基:采用固体琼脂培养基，即在基础培养基的基础上添加1.0%的琼脂。 

以上培养基初始pH值均用H3PO4调至7.0，经121℃灭菌30分钟，NaHCO3过滤除 菌后加入。培养条件:光照培养箱温度控制在30℃、光照强度控制在 3000uE.m-2s-1培养。 

光合细菌是一种兼性嫌气细菌，需要深层培养或在真空干燥器内达到嫌气或半嫌气状态，一般将混合菌放入培养液中先富集再分离。具体方法:将混合菌装入 10ml试管中，加入培养液充满至刻度，盖上胶塞，在光照条件下保持在30℃左右培养。待培养液出现红色后，取培养液加1.5%的琼脂，制成固体培养基，取菌液分别用无菌水以10-100000000倍稀释，分别取lml样本涂在平皿上，光照、30℃培养2d左右在平板上长出菌落。移至平板采用划线法进行分离，将划好线的平板倒置，在相同条件下培养，反复分离纯化，挑取不同特征的菌落，用斜面保存，纯化分离后的菌种置于冰箱保存备用。     

 PSB 培养中除碳、氮、磷等主要营养元素外，还需要一定量的镁、钙、钠和有关的微量元素，将所需的营养元素按一定的比例配成适于菌体生长繁殖的培养基。本实验室采用酵母膏、蛋白胨培养基，基本配方为:CaCl2 0.3g，MgSO4·7H2O 0.5g，酵母膏3g，蛋白胨3g，蒸馏水1000ml，pH: 6.8. 如需制固体培养基再加2%琼脂。培养温度：25℃～30℃最佳，光照强度：2000LX～5000LX，PH：7.5～8.5最佳。   

把菌种接种到灭好菌的培养基中，在三角瓶中进行二级培养，每天摇晃几次。把 40L 的反应器中加满自来水，放入通气管，盖上保鲜膜一起用次氯酸杀菌消毒24小时，用硫代硫酸钠（1L次氯酸需要150g硫代硫酸钠）来中和。以15%的接种量接入反应器中，用泵通气培养，用分光光度计跟踪测量菌液的密度，得到菌液的密度较高，而且反应器还可以进一步放大。