单细胞凝胶电泳实验的变化性一个重要问题,因为不同参数的旋转柱不同, 例如:浓度、放卷时间、电泳持续时间、电压梯度、电泳运行温度、使用的电泳槽类型四分之一的气象参考标准。这些必然会导致不同实验室测试结果的差异. 很大程度减少了彗星实验(CA)变化性带来的影响物理参数(电泳槽)、协议(处理)、标准(生物样品参考)。
瑞士4Ddlifetec公司开发了具有以下优点的创新单细胞凝胶电泳系统:
1、提供精确的温度和温度控制
2、具有专利、高均匀性和可控电场
3、通过96孔凝胶定位板(GSP)的开发,允许高穿透性分析
单细胞凝胶电泳系统对比情况
1、4DLifetank 单细胞凝胶电泳系统 VS 传统的商业产品:
为了证明4dlifetank的准确性,我们选择了基准商用CA电泳装置进行彗星分析CA。 使用行业参考细胞标准C0(未处理)和C1-C3(代表处理细胞内的DNA损伤) 我们使用制造商建议(表1)进行彗星分析CA。
使用蔡司AXIO显微镜(100个可重复彗星计数)并运用OpenComet plugin的成像软件进行分析。
2、4D Lifetank 单细胞凝胶电泳系统可变性评估:
为了评估可能的彗星分析CA变异性,我们比较了: a)斑点;b)孔板;c)进行试验的天数
3、zui优协议: 我们罗列了以下流程图中的每个参数证明4D LifeTM zui优协议(表1)
4、4D Lifetank单细胞凝胶电泳系统zui优化: 为了评估我们zui优化的彗星实验CA协议,我们用行业标准的生物样品做测试 展望—zui优的生物标准品 作为增加细胞DNA损伤范围和证明4Dlifetank性能的额外步骤, 我们创建了一套生物参考标准。电离辐射是易受伤害的强破坏剂, 因此使用X射线照射的A549电池(0-12Gy)并在4DLifeTank上运行。
结论:
1、通过使用4dlifeTank单细胞凝胶电泳系统,我们观察到剂量反应改善,结果变异性降低
2、通过进一步优化CA协议,我们进一步提高了CA的敏感性,并进一步降低了变异性。
3、通过优化生物样品参考,并在4DLifeTank单细胞凝胶电泳系统中以优化的协议运行这些参考,可以对自己的生物样品进行基准测试。