冰鲜鸡肉中致病菌三重PCR检测方法的建立

2014-12-19 15:26

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资料摘要：

建立在鸡肉生产一线具有较强操作性，并可同时检测沙门氏菌、单增李斯特菌、大肠杆菌O157的三重PCR 方法。【方法】利用该3 种致病菌的特异性基因invA、HlyA、rfbE 设计3 对引物，在确定方法特异性和抗干扰能力的基础上，用优化后的反应体系对反应灵敏度进行测定，模拟并检测在鸡肉中常见腐败菌和鸡肉基质对检测方法的干扰影响作用下，在前增菌程序的辅助下该方法的实际样品检测灵敏度。【结果】该方法特异性和抗干扰能力强，3 种致病菌测序结果的同源性分别达到100%、99%和99%，反应体系的最佳退火温度为51℃，灵敏度试验中3 种致病菌同时检出的检测线达到103 CFU/mL，单重的灵敏度达到101 CFU/g，模拟实际样品检测中，经过20 h 的前增菌后，三者同时检出的灵敏度达到101 CFU/g，单重PCR 的灵敏度达到100 CFU/g；对60 份屠宰线上的鸡胴体样品和32 份超市鸡肉样品中沙门氏菌、单增李斯特菌、大肠杆菌O157 的检出率分别为20%、3.3%、21.7%（屠宰线样品）和25%、21.9%、6.25%（超市样品）。【结论】成功建立了可同时检出鸡肉中沙门氏菌、单增李斯特菌和大肠杆菌O157 的三重PCR 方法，可为生产一线的致病菌检测提供参考。

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