CNS前沿文献追踪–呼吸道合胞病毒RSV进入细胞新机制

整理分享一篇关于病毒的文章，其实前面分享过相关文章 - 病毒进入细胞依赖内吞，已经分享过两篇关于内吞的文章，此外还分享过病毒如何在胞内组装的文章。这次的文章是关于细胞表面病毒受体的，具体内容如下：

作者研究的是呼吸道合胞病毒RSV的感染机制，RSV通过RSV-F蛋白和上皮细胞NCL互作感染细胞，IP看一下两者确实发生互作，同时量化一下RSV-F和NCL的亲和力

RSV感染水平和细胞表面NCl水平的关系前三种是呼吸道或肺泡上皮细胞，细胞表面NCL水平都不高，因此感染水平远低于高NCL的HeLa细胞

很有意思，1HAEo-（支气管上皮细胞系）表面NCL水平并不高，但95%-100%的1HAEo-细胞表面都粘着病毒 – RSV是怎么感染这种细胞表面低表达NCL的细胞呢？

用成像流式追踪细胞表面的RSV和NCL，发现感染初期细胞表面就有了很多RSV，而NCL定位到RSV则需要一定时间

用荧光显微镜也观察到早期RSV直接定位在细胞表面，后期才和NCL共定位，暗示NCL是感染后被召集到细胞表面的

追踪RSV感染后不同时间点NCL的水平：细胞表面NCL增加，细胞整体NCL表达并没有发生变化，暗示感染后NCL向细胞表面转位；用WB去看一下核内外的NCL，发现感染后核内NCL减少，核外NCL增加，再次暗示NCL发生了转位 – 有意思！是什么信号让NCL发生的转位呢？

文献报道病毒可以利用细胞表面受体激活相关信号调节入胞，作者用各种受体抑制剂去筛还存在什么受体调节RSV感染细胞，筛到了IGF1R（TLR4和NCL早有报道）：抗体或抑制剂阻断IGF1R后RSV感染减少；RSV的确存在共定位

验证筛到的IGF1R：蚊子细胞不会被RSV感染，让蚊子细胞表达IGF1R后看感染，发现表达IGF1R的蚊子细胞可以被感染，说明IGF1R的确参与RSV的感染

继续验证筛到的IGF1R：敲掉1HAEo-细胞的IGF1R后感染减少，再表达感染恢复 – 再次说明IGF1R调节RSV对细胞的感染

好的，IGF1R调节RSV对细胞的感染，那它和RSV上的什么蛋白互作呢？IP找到RSV-F和IGF1R互作，同时量化一下两者亲和力（可以去回看一下RSV-F和NCL的Kd值）

至此，作者找到了一个新的调节RSV感染的细胞表面受体IGF1R，有文献报道激酶也可调节病毒进入细胞，所以作者又用各种激酶抑制剂去筛选影响病毒感染的激酶，筛到了PKCζ（被抑制后RSV感染减少、NCL的召集减少；尽管ERK MAPK和PI3K被抑制后感染也减少，但它们不参与调节NCL的召集）。小结一下：作者找到了3个影响RSV和细胞互作的变量 – NCL、IGF1R、PKCζ，NCL和PKCζ初步建立 一点关联（PKCζ调控NCL召集）

NCL、IGF1R、PKCζ都调节RSV感染，NCL和PKCζ初步建立 一点关联，IGF1R和PKCζ存在关联吗？单独沉默IGF1R或PKCζ和同时沉默IGF1R、PKCζ对RSV感染的抑制程度相当，暗示两者通过同一通路调节RSV感染；病毒感染后观察到IGF1R磷酸化，病毒感染和IGF1R配体都能引起PKCζ活性升高，抑制IGF1R后PKCζ活性降低，暗示PKCζ是IGF1R下游的效应蛋白 – 挺好，“分子链条”隐隐成型RSV-F-IGF1R-PKCζ-NCL

NCL和PKCζ存在关联，IGF1R和PKCζ存在关联，IGF1R和NCL存在关联吗？答案是存在，用IGF1R配体IGF1激活IGF1R后可以观察到细胞表面NCL增加。“分子链条”成型RSV-F-IGF1R-PKCζ-NCL

前面的数据暗示病毒通过RSV-F和IGF1R互作激活PKCζ信号，下游信号召集NCL从核到病毒处，实际用活细胞成像拍一下这个过程；阻断NCL、IGF1R、PKCζ后荧光标记的病毒对细胞结合变少

细胞水平的实验某种程度上脱离了生理条件，所以作者利用ALI培养构建类器官系统：为感染RSV状态下NCL在内部，不出现在纤毛区，IGF1R出现在纤毛区，病毒感染3小时后NCL被召集出来

类器官上重新分子链条：看到RSV、IGFR、NCL共定位，抑制IGF1R或PKCζ后共定位受到影响 – 验证、重现所发现的分子链条

小鼠体内验证一下：抑制PKCζ后RSV感染被抑制

最后来个模式图：RSV先通过和IGF1R互作激活PKCζ，下游信号召集NCL到细胞表面，和病毒互作，调节病毒进入细胞

小而美的一篇文章，发现了一个病毒受体及受体下游的信号，并和主流受体建立了关联，再结合我们之前整理分享的文章，病毒感染细胞研究的技术路线已经基本覆盖 – 接触、进入、组装。笔者读个各种研究方向的文章，目前整理归纳了各个研究方向的技术路线，技术路线思维可以帮您提高研究效率，在有效开展自己工作的同时，还能让您很淡定的审视他人的工作，看到不足和发展的机会……

Cameron D. Griffiths, Leanne M. Bilawchuk, John E. McDonough, Kyla C. Jamieson, et al. IGF1R is an entry receptor for respiratory syncytial virus [J]. Nature, June 3, 2020.

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