G课堂 | 单抗隆抗体 vs 多克隆抗体

Hi~我又来啦！

    相信大多数做蛋白质纯化的同学都离不开这两个词：克隆&抗体。今天，小G就给大家讲一下单克隆抗体和多克隆抗体之间的你长我短。

    众所周知，单克隆抗体和多克隆抗体可以用于包括蛋白质印迹，酶联免疫吸附测定（ELISA），免疫沉淀（IP），免疫荧光，免疫细胞化学，生物芯片技术和疾病诊断在内的多种应用。它们各有各自的优点使其在不同应用中扮演着不一样的角色。为了更好地确定在特定应用中那种抗体最优，首先让我们先来了解下两者。

[单克隆抗体]

    单克隆抗体（mAb）指可以识别抗原内单个表位的抗体群体。由于mAb由免疫小鼠的脾或淋巴结中的单个B细胞产生，所以得到的抗体全部相同。除此之外，它们还可识别出特定抗原的相同表位。
然而，虽然B细胞可以用于收获这类抗体，但是这些细胞的寿命有限，所以最终会停止产生抗体。为了克服这个限制，特异性产生抗体的B细胞与骨髓瘤细胞融合以产生能够提供持续高度特异性单克隆抗体的恒定供应的永生化B细胞-骨髓瘤杂交瘤应运而生。
    单克隆抗体也可以针对许多靶标，鉴定特异性抗体特征（敏感性要求和交叉反应水平），并筛选单克隆抗体以鉴定表现出所需特征的任何细胞系。
    单克隆也可以产生与一组分子交叉反应。在参与试验的患者中，在有多种可能的待测药物组合的情况下，这可能是非常有用的。
    Monoclonals通常是老鼠或小鼠单克隆抗体，但它们也可以从各种物种（如兔和山羊）产生。

mAbs的优点

一、不朽的供应。
一旦创建了单克隆抗体杂交瘤，就可以产生无限量的高度特异性抗体。

二、高度特异。
mAb在测定中用作一级抗体或用于检测组织中的抗原是非常理想的选择。

三、重现性高。
单克隆抗体产生较低背景染色和批次变化，并且具有低交叉反应性。因此，它们提供可重复的结果并确保亲和纯化的效率。

[多克隆抗体]

    多克隆抗体（pAb）指已经被免疫动物（山羊，绵羊或兔）的免疫应答激活的多个B细胞克隆收集的抗体群体。与单克隆抗体不同，多克隆抗体识别抗原上的多个表位，并且所获得的血清含有许多不同亲和力的抗体。
    通常在注射特定抗原以引发初次免疫应答后，还会给动物进行二次和三次免疫以产生针对特定免疫抗原的较高滴度的抗体。之后收集含有抗体的血清，并进行亲和纯化，以富集针对抗原产生的抗体。该方法的最终目的是产生针对感兴趣的抗原的高滴度，高亲和力多克隆抗体。

pAbs的优点
大多数研究人员喜欢多克隆抗体的原因有很多。

一、高亲和力。
由于抗体的结合点多于一个表位，多克隆抗体可以帮助扩增具有低表达水平的靶蛋白的信号。这使得这些抗体成为免疫沉淀和染色质免疫沉淀的理想选择。

二、容忍轻微的变化。
多克隆相对单克隆抗体来说，对于抗原变化（轻度变性，多态性，糖基化的异质性）较不敏感。

三、更强的检测信号。
多个表位通常提供更强大的信号，更加容易检测。
此外，大多数实验室更喜欢多克隆抗体，因为它们不需要任何高度专业的培训或先进技术，并且生产相对快捷和便宜。

[Which one is better？]

   从产生方式来看。多克隆抗体是能够鉴定特定抗原的许多不同表位的抗体组，所产生的抗体来源于B细胞的选择，每个B细胞识别一个特定的表位。单克隆抗体有一个单一来源。多克隆抗体易于储存，更快地与所述抗原结合，并在鉴定和处理特异性表位时提供更强有力的保护。

But…….
多克隆抗体是否和单克隆抗体同样有效？
    多克隆抗体在某些情况下能够比单克隆抗体表现更好。因为它们具有连接到多种抗原的能力，所以它们能够扩展由目标产生的信号，即使它仅有非常低的强度。如当处理染色质免疫沉淀时，多克隆抗体是最有效的方法，因为它们具有更广泛的目标区域，并且在涉及某些类型的蛋白质的表达时可以获得最低的共振。另外多克隆抗体的主要优点之一是高度耐受许多变化，而这一点恰恰是单克隆抗体会产生的问题。它们比其他类型的抗体更坚强，可以承受更多的抗原中断或改变以及更恶劣的条件和更多样化的环境。其次，它是非常便宜和易于构建，使用它们的研究人员不需要进行任何类型的深度培训，也不需要高级技巧来操作和执行。
多克隆抗体的缺点是什么？
    单克隆抗体可以无限期地产生和收获，区别于只能在短时间内获得有限收获的多克隆抗体。多克隆抗体还需要许多多种动物来生产同一种抗体。而这些抗体不能连续地从相同的来源获得，这意味着它们可能存在差异性。所以当对测试动物进行研究时，需要不同组别，以保证多克隆抗体尽可能准确。
    所以，多克隆抗体不能取代由单克隆抗体产生的结果。 毕竟单克隆抗体会产生低染色效果和极小的差异。另一方面，因为多克隆识别抗原的几个表位，所以当靶标是单一抗原时，它们不是理想的。

【总结】    虽然多克隆和单克隆抗体在研究实验室中占有一席之地，但大多数研究人员只会因为具有成本效益且非常易于使用而直接选择多克隆，因为不需要技术上的重新学习，就可以生产。检测大量抗原的能力使其易用于多种测试。另外，耐受抗原变化的能力也让其成为比单克隆抗体更好的选择，毕竟像多态性和变性这样的变化可能会对某些测试的结果产生巨大的影响，而多克隆抗体可以抵抗这些变化，并允许测试产生更准确和简明的结果。另外，研究人员能够在预算紧张的情况下进行所需的测试。
    好了，我们下期再见。Bye！

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