基于流式细胞术的多指标高通量检测细胞因子方法

可溶性蛋白质的定量和定性分析多采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫印迹（Western Blotting）等方法，随着流式细胞术和固相化技术的发展和普及，采用流式细胞术同样可以对可溶性蛋白质进行定性和定量分析。
近些年，基于微球的多指标检测技术得到广泛的推广，与传统ELISA 技术只能检测一个指标相比，该技术能够实现从一份标本中同时检测多种指标，大大提高了科研人员的工作效率。
基于微球的检测法原理与夹心法免疫测定相同。荧光聚苯乙烯微球被抗原特异的抗体包被。已包被了抗体的微球混合物与样本孵育。样本中的待检物（如细胞因子等）与微球上包被的抗体结合。然后加入生物素标记的抗体混合物，与结合于捕获抗体（微球）的待检物特异性结合。加入Streptavidin-PE，生物素结合。用流式细胞仪根据微球大小和荧光标记强弱来区分微球群。2 种大小的微球（4.4μm、5.5μm，如图一左）内部分别标记 9、11 种不同强度的荧光染料（如图一中A、B），构成了20 种可以同时被流式细胞仪识别和区分的不同微球故可以同时在一份标本中进行多达20 种指标的检测。

图一：微球检测法原理
 
优点
1) 检测指标多：可选择使用96 孔板或单个流试管，每个标本可同时检测20 多个指标。
2) 可以自由组合检测指标：研究人员可以根据实验需要，自由组合检测指标，最多可同时检测20 个指标。
3) 操作简单便捷，节约成本：研究人员可根据条件选择使用96 孔滤膜板（试剂盒提供）或者流式管进行操作，一次实验可得到多个指标的结果，整个流程只需要3.5 小时，极大的节约了人力、物力和时间成本。
4) 需要标本量少：突破传统的ELISA 对标本需要量大的要求，仅仅25ul 的标本就可满足检测多个指标的要求。大大节省标本，尤其适用于珍贵标本的检测。
5) 适用标本范围广：适用于血清、血浆、全血、细胞培养上清和其它体液。
6) 同样的灵敏度，更宽的检测范围： 在保证等同于（或强于）传统ELISA的灵敏度的同时，将检测范围扩大到了13.7-20000pg/ml，最大程度的保证了所有标本的适用性。
 
设备
    贝克曼库尔特CytoFLEX化繁为简，卓越的灵敏度能应用于各类复杂的应用并适应各类型的检测样本，将其分析并整合为令人信服的数据。对稀有细胞和微颗粒检测所拥有的卓越能力以及完美兼容各类荧光素搭配，使CytoFLEX在同类产品中处于领先地位。其可靠的采样和流体系统设计支持微量上样管的样本获取，样本上样体积最小达到10 ul。CytoFLEX在多参数应用中同样展现出强大实力，对微颗粒的检测大小极限可低至200 nm。

图二：CytoFLEX八峰微球检测结果